Изследване на урината и слюнка за туберкулоза

Разнообразието от различни тестове за туберкулоза не са лесно да се обясни с диагнозата на заболяването, и неговото скрито. Хора от незапомнени времена се опитват да намерят начин да се идентифицират туберкулоза в ранните етапи, и следователно провели различни изследвания на пациенти, някои от които са наистина пуснала корени и методите за диагностициране на заболяване или като средство за мониторинг на процеса на заболяването.

Какви са тестовете за урина и слюнка?

loading...

Бак анализ за туберкулоза на слюнка и урина се прави, за да се открие наличието на агент в тялото. Целта на тези изследвания обаче е да потвърдят заболяването със съществуващи симптоми, а не да го намерят, тъй като за първичната превантивна диагноза има много други по-надеждни методи.

В допълнение, урина или слюнка и анализ слюнка на лекарите туберкулоза може да извърши за идентифициране на прехода затворена форма на болестта на открито, който се характеризира с отделяне на големи количества бацили с естествени течности и изпражненията на пациента, и следователно да стане много епидемиологично опасни за другите.

Изследване на урината

loading...

Отговорът на въпроса как да се премине тест за изследване на урината за туберкулоза е съвсем прост. Урината за туберкулоза се събира като всеки общ анализ на тази течност, познат на всеки от детството:

  1. Необходимо е да се събере първата част от урината сутрин, докато се събира само средната част, а не тази, която оставя първото или последното.
  2. Преди прибирането на реколтата трябва да се измиват старателно като контейнер, както и самите пикочо-половите органи, с цел да се вътре в буркан не се получи нищо допълнително: протеин, кръв, микроби и т.н.
  3. Необходимото количество течност за изследването е само 50-100 ml, така че не донасяйте половин литър урина.

OAM може да се приема във всяка клиника, но само специализирани лаборатории могат да намерят туберкулозни туберкули, които не са налични във всяко населено място в Русия. Нормалните резултати от това изследване изглеждат така:

  1. Цвят: жълт, слънчево-жълт или слама.
  2. Прозрачност: висока.
  3. Аромат: ненаситен.
  4. Реакционен рН: 4-7.
  5. Плътност: 1012-1022 g / l.
  6. Протеин: не, но понякога е допустима стойност до 0,033 g / l.
  7. Глюкоза: до 0,8 mmol / l.
  8. Кетони: не.
  9. Билирубин: не.
  10. Уролиноген: 5-10 mg / l.
  11. Хемоглобин: не.
  12. Еритроцити: при жените максималната допустима стойност е до три, а при мъжете до 1 в зрителното поле.
  13. Левкоцити: Допустимият брой тела в зрителното поле е 6 на жени и до 3 на мъже.
  14. Епителни клетки: до 10 бр. в очите.
  15. Цилиндри: няма или има индивидуален хиалин.
  16. Соли: не.
  17. Бактерии: не.
  18. Гъби: не.
  19. Паразити: не, но ако има, тогава не е ужасно: само в този случай се провежда терапия с антихелминтозни лекарства.

OAM индикаторите за туберкулоза обикновено остават същите. Единствените изключения са остри форми на заболяването, когато урината се променя поради аномалии във вътрешните органи и в хронични лезии на белите дробове или костите, когато анализа могат да бъдат симптоми на амилоидоза - разстройства на протеиновия метаболизъм, в които протеинът ще присъства в резултатите от проучването.

Изключение е туберкулоза бъбреците или пикочните пътища - най-често извънбелодробна заболяването, причинено от прехвърляне на кръвта инфекцията, туберкулоза е от анализа на урината варира значително. В този случай се наблюдават следните явления:

  • остра киселинна персистираща реакция;
  • левкоцитурия - белите кръвни клетки в урината;
  • протеинурия - протеин в урината;
  • еритроцитурия - кръв в урината;
  • пиурия - гной в урината.

Също така в остро заболяване или по време на туберкулоза в бъбреците и пикочния тракт инфекции в урината присъства бацили активна форма на средство, което се определя чрез оцветяване Ziehl-Nelson.

Изследване на слюнката

loading...

Всъщност, LHC не произвежда слюнков тест за туберкулоза. Анализирайки слюнката, доста често невежи хора наричат ​​раздвояване за туберкулоза. Вместо храчки анализ на слюнката за TB може да стане само в случай на много малки новородени бебета, които не са в състояние да се плюе течната отхрачващо, защото това автоматично поглъща веднъж веднага след отхрачването. Въпреки това, в този случай, лекарите просто вземат биопсия на тъкан или оттеглят белодробна тайна със сонда, не пълзи със слюнка.

Анализът на храчките върху патогена също се извършва, като се използва методът Tsilya-Nelson. В този случай, в допълнение към бацили някои признаци на белодробна патология могат да виждат с невъоръжено око: влакнести отливки, гной, кръв, парчета тъкан, и така наречените леща - големи включвания на карфица или по-малко кръгла форма, в рамките на който обикновено има голям брой бактерии.

Метод на Ziehl-Nelson оцветяване

loading...

Метод оцветяване Ziehl-Nelson основава на киселинна устойчивост на Mycobacterium туберкулоза, които могат да бъдат оцветени само при топлинна обработка. По време на това проучване, телесна тъкан, слюнка, урина, кръв, или всяко друго вещество, анализът на който е необходимо присъствието на Службата да напусне в благоприятна среда за семена за размножаване на бацили, ако има, разбира се, и след това се нагрява и се оцветяват. След това всичко се поддържа в киселинен режим до промяна на цвета и отново цветът вече не се загрява в друг цвят. В резултат MBT е доста лесно да се открие, тъй като те остават в цвета на първия цвят и се отличават добре от общия фон.

Бележник на фтизиатрия - туберкулоза

loading...

Всичко, което искате да знаете за туберкулозата

Тестове за туберкулоза в кръвта и урината

loading...

VA Koshechkin, Z.A. Иванова

Елементи на червена кръв, като правило, малка промяна в туберкулозата. Само след остра загуба на кръв от белите дробове или червата може да има анемия. Лек спад в нивото на хемоглобина може да се наблюдава при хронични форми на фиброзна кавернозна пулмонарна туберкулоза.

Един от показателите за активността на туберкулозния процес е ESR (степен на седиментация на еритроцитите). Ускореният ESR корелира не само с активността и степента на текущия свеж процес, но и с обострянето на хронични, особено фибро-каверни, процеси.

Елементи на левкоцитната фракция на кръвта реагират по-активно на туберкулозния процес.
Обикновено има три фази на промени в левкоцитната фракция на кръвта, свързани с естеството на лезиите при белодробна туберкулоза.
1. Неутрофилна фаза на битката. В кръвта процентът на неутрофилите се увеличава, в резултат на което има промяна на формулата вляво. Отсъстват еозинофили, намалява се броят на лимфоцитите и моноцитите.
2. Моноцитната фаза - Преодоляване на инфекцията. брой кръвен лимфоцит повишена кръвна се измества наляво, броят на неутрофилите се намалява, определени единични еозинофили.
3. Фаза на възстановяване. Делът на лимфоцитите и еозинофилите се увеличава. Кръвта постепенно се нормализира.
Това разделяне на фазите отразява само общата кръвна реакция.

Ядрено отместване на неутрофилите при туберкулоза
В допълнение към количествената, неутрофилната група има качествена характеристика, която е много по-тънка и по-рано показва различни патологични процеси.

Трудерозозата при възрастни обикновено е вторичен процес, най-често причинява в кръвта само увеличаване на неутрофилите. Когато се експресира инфилтративни форми и смяна оставени се открива съвсем ясно пневматичните белодробната тъкан гниене феномени неутрофили и може да достигне 20-30% хладно оръжие.

Белодробен инфилтрат същото не гние и фокусно TB по време на първата си обостряне или идентифициране при температура subfebrile и Just забележими функционални нарушения осигуряват по-слабо изразена промяна. В същото време останалите елементи на хемограмата изобщо не могат да открият аномалии. Следователно, задълбоченото определяне на ядрената промяна е особено важно при туберкулозата.

Доктрината за ядрено отместване на неутрофилите се развива от Arnet (1905) въз основа на изследване на кръвта при различни инфекции, включително туберкулоза.

Извършвайки тежки изчисления с многобройни скици, Арнет забеляза определена регулярност в конфигурацията на неутрофилните ядра.

Кръвта на здравия човек съдържа:

  • 5% неутрофили с неразредено гърло, неразградено ядро ​​(1-ви клас);
  • 35% от неутрофилите с два сегмента, свързани с нишка (клас II);
  • 41% неутрофили с три сегмента (степен III);
  • 17% неутрофили с четири сегмента (степен IV);
  • 2% неутрофили с пет сегмента (клас V).

В допълнение към сегментацията на ядрото, Arnet също така взе под внимание формата си. Така че, за първия клас, той избра няколко подкласа за степента на депресия на несегментираното ядро. Останалите класове са разделени на подкласове в зависимост от формата на сегментите.

За инфекции пропорционално на тежестта mnogosegmentirovannyh брой форми се намалява, malosegmentirovannyh номер (2-3 сегмент) и не-сегментиран (които са относително малки клетки) се увеличава.

В схемата на Arnet броят на несегментираните неутрофили от клас I е представен вляво; правото е броят на клетки от клас II, клас III и след това т. г. Следователно, увеличаване на не-сегментиран форма и брой malosegmentirovannyh отляво верига клетки се увеличава и има "олевяване".

изследване на урината
Екскрецията на урина при пациенти с туберкулоза е почти нормална. Патологични промени в урината могат да бъдат, ако туберкулозата засяга бъбреците или пикочните пътища.
Пациентите с хронични форми на белодробна туберкулоза или кости може да имат признаци на амилоидоза.

Анализ на кръвта и урината.

loading...

Елементи на червената кръв, като правило, се променят малко с туберкулоза. Само след остра загуба на кръв от белите дробове или червата може да има анемия. Лек спад в нивото на хемоглобина може да се наблюдава при хронични форми на фиброзна кавернозна пулмонарна туберкулоза. Един от показателите за активността на туберкулозния процес е ESR (степен на седиментация на еритроцитите). Ускореният ESR корелира не само с активността и степента на текущия свеж процес, но и с обострянето на хроничните, особено фибро-кавернозните процеси. Елементите на левкоцитната фракция на кръвта реагират по-активно на туберкулозния процес.

Обикновено три фази на промени в левкоцитната фракция на кръвта са свързани с естеството на лезиите при белодробна туберкулоза:

  1. Неутрофилна - фазата на борбата. В кръвта процентът на неутрофилите се увеличава, в резултат на което има промяна на кръвната формула вляво. Отсъстват еозинофили, намалява се броят на лимфоцитите и моноцитите. Лимфопенията е характерна за прогресивните форми на туберкулоза.
  2. Моноцитната фаза е преодоляването на инфекцията. брой кръвен лимфоцит повишена кръвна се измества наляво, броят на неутрофилите се намалява, определени единични еозинофили.
  3. Фазата на възстановяване. Делът на лимфоцитите и еозинофилите се увеличава. Кръвта постепенно се нормализира.

Това разделение на фази отразява само общите кръвни реакции, които не отразяват сложността на кръвните реакции на хронична туберкулозна инфекция.

Ядрено отместване на неутрофилите при туберкулоза.
В допълнение към количествената, неутрофилната група има качествена характеристика, която е много по-тънка и по-рано показва различни патологични процеси. Трудерозозата при възрастни, обикновено след първичния процес, най-често причинява в кръвта само увеличаване на неутрофилите. Когато се експресира инфилтративни форми и смяна оставени се открива съвсем ясно пневматичните белодробната тъкан гниене феномени неутрофили и може да достигне 20-30% хладно оръжие.

Белодробен инфилтрат без разпадането и фокусно TB по време на първата си обостряне или идентифициране при температура subfebrile и Just забележими функционални нарушения осигуряват по-слабо изразена промяна. В този случай останалите елементи на хемограмата напълно не могат да дават отклонения от нормата. Следователно, задълбоченото определяне на ядреното изместване има диагностично значение при туберкулозата.
Доктрината за ядрено отместване на неутрофилите е развита от Арент въз основа на изследването на кръвта за различни инфекции и особено за туберкулозата. Извършвайки тежки изчисления с многобройни скици, Арнет забеляза определена регулярност в конфигурацията на неутрофилните ядра. В кръвта на здрав човек, неутрофилите с неразредени стеснения, неразграденото ядро ​​(клас I) са 5%; неутрофили с два сегмента, съединени с нишково свиване (клас II), 35%, III клас 41%, IV клас 17% и клас V 2%. За инфекции пропорционално на тежестта партиден номер на сегментирани форма намалява броят на сегментния малки (2-3 сегмент) и не-сегментирани увеличава. В схемата на Arnet броят на несегментираните неутрофили е написан отляво; се намира в дясно на броя на клетките от клас II, клас III и след това т. г. Следователно, чрез увеличаване на броя на не-сегментиран и лявата страна на клетъчни вериги форма сегментирани малко повишен и има "олевяване".

Признаци на туберкулозния процес, в допълнение към промените в хемограмата, са хипонатриемия. Това е най-характерното метаболитно изместване. Причината за хипонатремия е развитието на белодробна тъкан, засегната от туберкулоза от антидиуретично хормонално вещество. Особено интензивно, това вещество се произвежда през периода на широко разпространени цезаро-разрушителни форми.

Изследване на урината.
Екскрецията на урината при пациенти с туберкулоза е почти нормална. Патологични промени в урината могат да бъдат, ако туберкулозата засяга бъбреците или пикочните пътища. В урината се откриват протеини, бели кръвни клетки, МВТ. При пациенти с хронични форми на белодробна туберкулоза или кости могат да се идентифицират признаци на амилоидоза (персистираща рететурия, макрохематура).

Диагностика на туберкулозата чрез анализ на кръвта и урината

loading...

Елементи на червената кръв, като правило, се променят малко с туберкулоза. Само след остра загуба на кръв от белите дробове или червата може да има анемия. Леко понижение на нивото на хемоглобина може да се наблюдава при хронични форми на фибро-кавернозна пулмонарна туберкулоза.

Един от показателите за активността на туберкулозния процес е ESR (степен на седиментация на еритроцитите). Ускореният ESR корелира не само с активността и степента на текущия свеж процес, но и с обострянето на хронични, особено фибро-каверни, процеси.

Елементите на левкоцитната фракция на кръвта реагират по-активно на туберкулозния процес.

Обикновено има три фази на промени в левкоцитната фракция на кръвта, свързани с естеството на лезиите при белодробна туберкулоза.

  1. Неутрофилната фаза на битката. В кръвта процентът на неутрофилите се увеличава, в резултат на което има промяна на формулата вляво. Отсъстват еозинофили, намалява се броят на лимфоцитите и моноцитите.
  2. Моноцитната фаза е преодоляването на инфекцията. брой кръвен лимфоцит повишена кръвна се измества наляво, броят на неутрофилите се намалява, определени единични еозинофили.
  3. Фазата на възстановяване. Делът на лимфоцитите и еозинофилите се увеличава. Кръвта постепенно се нормализира.

Това разделяне на фазите отразява само общата кръвна реакция.

Ядрено отместване на неутрофилите при туберкулоза

В допълнение към количествената, неутрофилната група има качествена характеристика, която е много по-тънка и по-рано показва различни патологични процеси.

Трудерозозата при възрастни обикновено е вторичен процес, най-често причинява в кръвта само увеличаване на неутрофилите. Когато се експресира инфилтративни форми и смяна оставени се открива съвсем ясно пневматичните белодробната тъкан гниене феномени неутрофили и може да достигне 20-30% хладно оръжие.

Белодробен инфилтрат същото не гние и фокусно TB по време на първата си обостряне или идентифициране при температура subfebrile и Just забележими функционални нарушения осигуряват по-слабо изразена промяна. В същото време останалите елементи на хемограмата изобщо не могат да открият аномалии. Следователно, задълбоченото определяне на ядрената промяна е особено важно при туберкулозата.

Доктрината за ядрено отместване на неутрофилите се развива от Arnet (1905) въз основа на изследване на кръвта при различни инфекции, включително туберкулоза.

Извършвайки тежки изчисления с многобройни скици, Арнет забеляза определена регулярност в конфигурацията на неутрофилните ядра. Кръвта на здравия човек съдържа:

  • 5% неутрофили с неразредено гърло, несегментирано ядро ​​(1-ви клас);
  • 35% от неутрофилите с два сегмента, свързани с нишка (клас II);
  • 41% неутрофили с три сегмента (степен III);
  • 17% неутрофили с четири сегмента (степен IV);
  • 2% неутрофили с пет сегмента (клас V).

В допълнение към сегментацията на ядрото, Arnet също така взе под внимание формата си. Така че за класа той е избрал няколко подкласа за степента на депресия на несегментираното ядро. Останалите класове са разделени на подкласове в зависимост от формата на сегментите.

За инфекции пропорционално на тежестта образува умствено тип mnogoseg- брой намалява броя malosegmentirovannyh (2-3 сегмент) и не-сегментиран (които са относително малки клетки) се увеличава. В схемата на Arnet броят на несегментираните неутрофили от клас I е показан отляво; правото е броят на клетки от клас II, клас III и след това т. г. Следователно, увеличаване на не-сегментиран форма и брой malosegmentirovannyh отляво верига клетки се увеличава и има "олевяване".

изследване на урината

Екскрецията на урина при пациенти с туберкулоза е почти нормална. Патологични промени в урината могат да бъдат, ако туберкулозата засяга бъбреците или пикочните пътища.

Пациентите с хронични форми на белодробна туберкулоза или кости може да имат признаци на амилоидоза.

35. Диагностична стойност на изследването на кръвта и урината при пациенти с туберкулоза.

loading...

Кръвен тест Хемоглобинът и еритроцитите в повечето случаи остават непроменени, с изключение на случаите, придружени от остра кръвозагуба. Индикатор, който свидетелства за наличието на активен туберкулозен процес, е скоростта на утаяване на еритроцитите. Ускореният ESR е характерен не само за прясна активна туберкулоза, но и за обостряне на хроничния процес. Останалите параметри на кръвния тест варират значително в зависимост от естеството на увреждането на белите дробове. Промени в периферните параметри. кръв с туберкулоза. няма специфичност, но хемограмата помага диагностицирането. фаза туберкулоза. обработват и оценяват тежестта. нейния поток. Хора, които са били изследвани за туберкулоза и туберкулозни пациенти. възложен. кръвен тест с определението за ESR, съдържащ етер. и левкемия, концентрация на хемоглобина и преброяване на левкоцитната формула. Препоръчват се пациенти с туберкулоза в присъствието на пием. за определяне броя на ретикулоцитите за оценка на регенератите. способността на костния мозък, при диференциално-диагностични случаи - съдържанието на тромбоцитите. Промени в хематолога. индикаторите зависят, от една страна, от локализацията, природата и тежестта на инф. процес, от друга страна - за състоянието на организма, неговите компенсаторни резерви. Хемограма. а по-скоро фаза на процеса от неговия клин. оформят. Например, при пациенти с широко разпространени разрушителни форми на туберкулоза, с компенсация за процеса и отсъствие на свежо възпаление. промени в модела на кръвта могат да бъдат нормални. Оздравяване на епруветките. процесът обикновено е съпроводен от пробиване на неутрофилна смяна, лимфопения и увеличаване на ESR. Тот. броя на белите кръвни клетки. повечето пациенти са в нормални граници. Само остър и тежък курс се характеризира с повишаване на съдържанието на левкоцитите в кръвта до 15 х 109 / L Неутрофилното изместване на левкоцитната формула вляво става по-значимо. С тежестта на заболяването (особено при милиарна туберкулоза) може да възникне левкемидна реакция от миелоиден тип. Запушването на острия процес води до нормализиране на посочените промени, появяване на лимфоцитоза. При хронично хематогенно разпространено и фокално туберкулоза може да се наблюдава неутропения и лимфоцитоза.

изследване на урината. При анализа на урината при пациент с белодробна туберкулоза няма забележими аномалии. Промените се появяват само при туберкулозни лезии на бъбреците и пикочните пътища. Необходима е рутинна изследване на урината за туберкулоза не само в случай на съмнение за бъбречно увреждане. В последния. той е единственият. за ранна диагностика. Устойчиво присъствие на гной в урината и, най-важното, туба. бактериите, разбира се, сочи към тръбата. бъбрек. Понякога обаче това се изисква. Issled. урина за откриване на патолог. констатации; така че за някои. форми на туберкулоза. анализ на урината месечно (разпространени форми, усложнен първичен комплекс). Малки промени в урината под формата на следи от протеин, единични. левкоцитите и свежите еритроцити могат периодично да бъдат откривани като феномен на обща интоксикация. И накрая, някои реакции с урина дават индикация за тежестта на процеса. Сред тях е появата на диазорната реакция при обобщенията. форми на туберкулоза, особено с милиардна туберкулоза.

Без съмнение, прогностична стойност по време на туберкулоза има urohromogennaya REA-I. Това е много просто и това е голямото му предимство. Тя произвежда. марка. начин: вземете филтрираната урина и я разредете 10 пъти. Излива се в две тръби, един е контрол и се прибавя към друг разтвор на калиев перманганат 1: 1000. Ако положителен отговор се получава ин витро остър канарче оцветяване който показа много ясно в сравнение с контролата. Необходимо е да се вземат предвид само добре изразени. цвят. Механизмът на реакцията е, че калиев перманганат окислява безцветно urohromogen в урината, което увеличава значително през прогресивна туберкулоза.

Какви са тестовете за белодробна туберкулоза?

loading...

Всички пациенти получават лабораторни изследвания. Тъй като болестта е заразна за другите, своевременно разследване на биологичен материал допринася за точността на диагнозата и да помогне за наблюдаване на напредъка на лечението.

Списък на лабораторните тестове за белодробна туберкулоза

loading...

Списък на тестовете за туберкулоза

Списъкът на задължителните тестове за белодробна туберкулоза е както следва:

  • изследване на храчките - в присъствието на кухините в нея се откриват телешки ориз протеин, еластични влакна, калциева сол;
  • анализ на ексудатите - показва неутрофили и ендотелни клетки с преобладаване на левкоцити;
  • анализ на бронхоалвеоларната промивка Това показва намалено количество на алвеоларни макрофаги с рязко увеличение на неутрофили с активна ТВ по време на процеса, и ако по време на показателите на съня макрофаги повишени леко;
  • серологични тестове, или ензимен имуноанализ, се вземат за определяне на серумните имуноглобулини за микобактериални антигени. Съотношението на диагностичния титър на антителата към причинителя на болестта надвишава стойността 1: 8.

Какво показват резултатите от кръвните тестове?

Поради биохимичен анализ на кръвта в белодробни експерти туберкулоза имат възможност да се определи ориентация и протеинови промени и неговите фракции в кръвния серум на. Това определя формата и етапа на заболяването. Нивата на пикочна киселина, мед, холестерол и лизозим са превишени. Активността на креатин киназата и ангиотензин-конвертиращия ензим се наблюдава. Поради по-ниското рН и повишеното pCO2 се развива респираторна ацидоза.

Що се отнася до параметрите на хемоглобина, тяхното намаляване, което води до развитие на анемия, не е характерно за туберкулозния процес.

Анализ на урината при туберкулозни пациенти

Има ли тест за урина за белодробна туберкулоза?

Екскрецията на урината при туберкулозни пациенти остава нормална. Патологичните промени обикновено се появяват в случай, че бъбреците са участвали в туберкулозен процеса и пикочния тракт. При пациенти с хронично заболяване, по време на проучването могат да се открият признаци на амилоидоза.

Какво показва анализът на урината при белодробна туберкулоза, каква информация може да покаже развитието на патологичния процес в организма?

  1. Плътността е 1.015 - 1.025.
  2. Еднократното наличие на червени кръвни клетки е разрешено при деца - не повече от 5.
  3. Левкоцитите не трябва да бъдат повече от 2 единици, за жените и момичетата - до 5 единици.
  4. Стойностите на солта не трябва да бъдат значителни.
  5. Допустимата стойност на плоския епител е до 5 единици.

Какво ще покаже кръвен тест за белодробна туберкулоза

loading...

Туберкулозата е опасно и усложнено заболяване при лечението. Ефективността на лечението зависи от това колко навременно е разкрито. Никой не е имунизиран срещу инфекция, абсолютно всеки може да се разболее - възрастни, деца, възрастни хора.

При липса на необходимото своевременно лечение затворена форма влезе в опасни отворени, следователно диагностиката в ранните стадии на болестта е изключително важна и това може да се постигне чрез редовни и изчерпателни проучвания.

В тази статия ще разгледаме различни методи за диагностициране на това белодробно заболяване и също така ще се опитаме да определим кой кръвен тест за белодробна туберкулоза е най-надеждният и информативен.

Когато има нужда да се проверява за туберкулоза

loading...

Така че проучването е необходимо, когато:

  • контакти с носители на болестта;
  • обща слабост;
  • намаляване на теглото;
  • повишаване на температурата през нощта;
  • хронична кашлица.

Особено важно е да се определи наличието на туберкулоза в детска възраст навреме, тъй като е много вероятно децата да инфектират по-нататък патологични процеси в тялото.

Важно! Една от превантивните мерки е ваксинирането с BCG на 4 дни живот дете и в 7-годишният възраст. Тялото на детето е по-слабо от възрастен, затова е важно да го защитите от инфекция и да ваксинирате.

Изследвания на подозирана туберкулоза

loading...

Туберкулозата може да бъде идентифицирана по няколко начина.


Снимка 1. Фрагмент от рентгеново изображение на гръдния кош на пациент с туберкулоза. Флуорографията е един от най-надеждните методи за диагностициране на това заболяване, но е най-ефективен в отделението с други. Например, подробен кръвен тест ще покаже туберкулоза дори на ранен етап.

  1. Рентгеново изследване.Оценката на степента на увреждане на белите дробове ще помогне на флуорографията. Въпреки това, трябва да се има предвид, че началните етапи на развитие на болестта няма да бъдат видими на рентгеновите снимки. Изпитът трябва да бъде изчерпателен. За по-пълно изследване дробовете на пациента трябва да бъдат снимани отпред и отзад.
  2. Туберкулинов тест. При изследването на децата най-често се използва туберкулиновият тест (реакцията на Мантукс). Туберкулинът е смес от протеини, изолирани от мъртви патогени. Въвеждането на лекарството под кожата предизвиква реакция на имунитет, който се проявява по различни начини. Ако в тялото няма патогени, то след няколко дни след инжектирането няма да има видима следа. Ако мястото на инжектиране на пробата или образуването на язва се възпламени, вероятността за инфекция на пациента е висока.

Важно! Реакцията на Мантукс не дава възможност да се определи наличието на туберкулоза със 100% вероятност, но тя ще помогне да се определи рисковата група за болестта. С повишено внимание, струва си да опитате тези, които страдат от алергии. Въвеждането на състава на органа може да реагира по непредсказуем начин.

  1. проучванеуринаи кръв. Резултатите помагат да се открият следи от патогена. Зададен за идентифициране на крайната диагноза и степента на заболяването.
  2. структурахрачки. Наличието на Mycobacterium tuberculosis позволява да се определи и изследва храчките. Материалът показва излишък от нормата на протеина, който го отличава от бронхиалната храчка, както и патогените на инфекцията.

Възможно ли е да се определи туберкулозата чрез общ кръвен тест

loading...

структура еритроцити (червените клетки) в присъствието на бактерии варира незначително. Острата чревна или белодробна хеморагия провокира анемия, значителен понижаване на хемоглобина.

Има хора, които се съмняват дали туберкулозата може да бъде определена чрез анализ на кръвта. Всъщност, един общ анализ е в състояние да идентифицира развиващите се възпалителни и патологични процеси в организма чрез повишен процент на ЕСР. Повишеният индекс показва не само активността и продължителността на настоящото възпаление, но и обострянето на хроничните, особено в крайните стадии на заболяването.


Снимка 2. Лекарят изпълнява процедурата за събиране на кръв от вената на пациента с помощта на спринцовка. След това ще се извърши кръвен тест, с туберкулоза, чиито показатели ще покажат възпалителните процеси.

Важно! Нивото на ESR може да бъде объркано с показателите за възпаление или рак на белия дроб. В този случай е необходимо да се разследва брой еозинофили (един от видовете левкоцити). Ако се увеличат еозинофилите и левкоцитната формула показва рязка промяна в кръвния тест, това се случва с туберкулозата и се изключва от пневмония.

Имат ли клинични и биохимични кръвни тестове точни?

Клиничният кръвен тест за белодробна туберкулоза често е недостатъчен за диагностициране туберкулозен бацил. След това е необходим допълнителен цялостен преглед. Същото може да се каже и за биохимичния кръвен тест. При туберкулоза в първоначалния стадий или в латентна форма той най-вероятно няма да покаже никакви аномалии. И само при остри форми на заболяването коефициентът на албумин-глобулин в него ще бъде понижен.

Видове кръвни тестове за антитела срещу туберкулоза

loading...

Има по-точни методи за изследване на кръвта, по-дълбоки от ОАК, които позволяват да се идентифицира туберкулозата. Как да определите чрез такива кръвни тестове, имате ли заболяване, ще разгледаме допълнително.

Определянето на обективна диагноза е възможно с използването на подходи полимеразна верижна реакция (PCR) и ензимен имуноанализ (ELISA).

Дали ELISA показва наличието на туберкулоза?

С помощта на IFA разкрива наличието на патогени в пациента. Методът е удобен, тъй като ви позволява едновременно да изследвате голям брой образци. Въпреки това тя е с ниска чувствителност и се препоръчва за използване в райони с ниска честота на заболеваемост.

Какви промени разкрива PCR методът?

метод PCR се отнася до най-продуктивните. Използва се за откриване на болестта, определяне на тежестта и ремисия при лечение чрез откриване на ДНК на микробактерии.

PCR се използва за:

  • откриване на прогресиращо пробождане на Кох;
  • тест за откриване на екстрапулмонарна туберкулоза;
  • бързо създаване на огнища на локализация на инфекциите;
  • диагностика на повторение на заболяването;
  • мониторинг на курса на лечение.

И това, и друг кръвен тест за антитела срещу туберкулоза, се считат за достатъчно надеждни. Но има и други.

Алтернативни методи за изследване на кръвта

По-малко от PCR и ELISA са чести за откриване на патогенни микробактерии Проби за освобождаване на интерферон гама. Той може да бъде извършен вместо туберкулинов тест. Реакцията показва образуването на гама-интерферон в отговор на въвеждането на микробактерии. Резултатите могат точно да определят наличието на инфекция.

Друг алтернативен метод на изследване е QuantiFERON-TB Gold. Този метод най-често се използва за тестване на деца, които имат тежки алергични реакции към туберкулиновия тест.

Важно! И двата метода не позволяват да се определи степента на развитие на инфекцията - активна или латентна.

Участващият лекар определя кой тип кръвен тест ще бъде използван. Най-често проучването се извършва по сложен начин. Анализът на кръвта в латентната форма на туберкулоза като цяло не може да даде резултати.

Как се декодират резултатите от кръвните тестове?

loading...

При интерпретиране на общ кръвен тест, заслужава да се обърне внимание на нивото на ESR, хемоглобина, левкоцитите.

Ниво на ESR един здрав човек ще има по-малко от 50 единици, излишъкът от този индикатор показва възпалителен процес в тялото.

Брой на левкоцитите в кръвта пациентът с туберкулоза достига 6 на 10 9 / литър, при остри и тежки случаи на заболяването - 12-15 до 10 9 / л.

Съставът на червените кръвни клетки повечето пациенти остават нормални. Ниският хемоглобин е фиксиран с милиард туберкулоза, каузна пневмония.

Остри, прогресивни и сложни форми на промяната на болестта leukogram. В някои случаи, умерена левкоцитозадо 10 000-15 000 бели кръвни клетки), по-рядко левкопения.

Каквото и да правите кръвния тест за белодробна туберкулоза, дешифрирането им е работата на опитни експерти. Само те могат точно да определят колко туберкулоза се задейства, ако се открие. Анализите на ELISA и PCR се дешифрират същите. При специални форми се посочва отрицателен или положителен резултат срещу откритата инфекция.

Видове анализи за лечение

loading...

Трудността на лечението е, че инфекцията може да стане стабилен към всякакъв вид антибиотици, особено в напреднали стадии, както и в дългосрочен план инкубационен период, по време на които не е възможно да се определи инфекцията.

След като идентифицира и предпише подходяща терапия, процесът на възстановяване се наблюдава редовно 1-2 пъти месечно. Пациентът дава кръв и храчки.


Снимка 3. Медицинска маса в кабинета на лекаря след събиране на храчки от пациента. Пробите от храчки се затварят в пластмасови епруветки и се очакват лабораторни тестове.

Общият кръвен тест, Mantoux тестът, флуорографията може да се направи в почти всеки медицински център, това се прави веднага, ако се получи подозрение. Въз основа на констатациите, терапевтът ще направи заключение за отсъствието патологични промени в тялото или дават указания за по-нататъшно изследване в диспансера за туберкулоза.

Провеждат се специализирани и по - точни изследвания Туберкулозни диспансери, които са оборудвани с лаборатории и необходимите реагенти за изследване.

Така че, обобщавайки горното:

  • туберкулоза опасно заболяване, което е изключително важно да се открие навреме;
  • увеличено ESR, спиране на тока в белите дробове, промяна в левкограмата дават основа за изпращане на пациента за по-нататъшно изследване за идентифициране на инфекцията;
  • лечението се извършва с помощта на антитуберкулозни лекарства; Интензивната фаза на лечение продължава, докато се получи положителната динамика на клиничните и радиологичните показатели.

Полезно видео

loading...

Предлагаме ви да гледате видеоклип, който също така отговаря на въпроса дали е възможно да се идентифицира туберкулозата чрез кръвен анализ. В него се описва количественият тест QuantiFERON TB Gold, който показва туберкулозата в кръвния тест за имунен отговор.

Декодиране на общия кръвен тест за туберкулоза при възрастни и деца

loading...

Инфекцията с бактерия от туберкулоза вече не е присъда за човек. Съвременната медицина използва ефективни средства за борба с това заболяване, ако се открие на ранен етап. С течение на времето, за да се открие патологията, се подпомагат редовните превантивни прегледи и тестове, включително общ кръвен тест за туберкулоза.

Промяна в клиничната картина

Общият кръвен тест за белодробна туберкулоза (UAC) няма специфични прояви. Маркерите, които говорят за развитието на туберкулозата и за определяне на стадия на болестта, не съществуват. Но за неспецифични симптоми може да се прецени скрит възпалителен процес и да се подозират промени в белите дробове.

Отклонение на еритроцитите от нормалните

С лека форма или локализирана лезия броят на червените кръвни клетки в кръвта не се променя, но цветът им се променя. Нивото на хемоглобина в червените кръвни клетки намалява. Това състояние се нарича хипохромия.

При значителни инфилтрационни лезии на белодробна тъкан клиничен кръвен тест показва намаляване на броя на червените кръвни клетки, намаляване на техния размер. Появяват се незрели клетки - ретикулоцити, които са "прекурсори" на червените кръвни клетки. В началния стадий на туберкулоза количеството на ретикулоцитите не надвишава 0.5%.

Тежката анемия е по-често при възрастни с напреднала форма на туберкулоза. В този случай броят на ретикулоцитите се увеличава до 1% от общия брой червени кръвни клетки.

Прехвърляне на левкоцитната формула

Левкоцитите като клетки на имунната система участват в отговор на заболяването на първо място. Общият анализ на кръвта и изследването на левкограмите определят както наличието на възпалителния процес, така и неговия стадий.

В неусложнена затворена форма се наблюдава значително увеличение на броя на неутрофилите - белите кръвни клетки, отговорни за борбата с бактериалната инфекция. Появяват се промиелоцити - незрели левкоцитни клетки, които обикновено не се срещат.

Продължителната, тежка, белодробна туберкулоза се съпровожда от дегенеративни промени в неутрофилите, образуването на патологична гранулост. Броят на еозинофилите рязко намалява. Установено е лимфопения - намаляване на броя на лимфоцитите. Всички тези признаци показват продължителен възпалителен процес, придружен от образуването на гнойни и некротични маси.

Промяна в ESR

За да се определи туберкулозата в активната й фаза помага на ESR - индикатор за скоростта на седиментация на еритроцитите. Теглото на червените клетки и тяхното бързо утаяване се улесняват от адхезията на имуноглобулините, фибриногена. Обикновено тези нива на кръв при мъжете не надвишават 10 mm / h, при жените - 15 mm / h. Ускорението на ESR до 80 mm / h показва активиране на възпалителния процес в тялото.

Характеристики на показателите при деца

Анализът на кръвта за туберкулоза при дете не се различава много от промените при възрастни. Декодирането на резултата се извършва за едни и същи показатели:

  • В началната фаза на заболяването формулата на еритроцитите се променя незначително. Анемията може да бъде открита само когато формулярът е разрушителен. В други случаи броят на червените кръвни клетки остава непроменен, докато процентът на незрелите еритроцити се увеличава. Туберкулозата при деца може да се подозира, ако се установи ретикулоцит над 1 ррт.
  • Индикаторите на левкоцитите също са подложени на промени. Развива левкоцитозата - увеличение на общия брой на белите кръвни клетки, дължащо се на неутрофилите, и броят на лимфоцитите е рязко намален. При норма за деца над 6 години 40% броят на лимфоцитите при туберкулоза е не повече от 20%.

В ранните стадии на заболяването се увеличава броят на еозинофилите-клетки, които реагират на появата на алергична реакция. Силното намаление показва, че процесът преминава в активната фаза.

  • В детството ESR не надвишава 10 mm / h. Ускорението до 50 мм / ч показва мобилизирането на защитните сили на организма за борба с възпалителния процес.

При детето началният стадий на заболяването често протича без очевидни симптоми или прикривания при ARVI.

Промени в зависимост от етапа на заболяването

Възможно ли е да се установи наличието на фокус на туберкулоза с помощта на лабораторни кръвни тестове? За съжаление не. Общият кръвен тест за туберкулоза е в състояние да открие възпалителния процес само в определени стадии на заболяването.

  1. На етапа на инфилтрация, левкоцитите леко реагират, ESR се увеличава.
  2. В етапа на гниене се наблюдават значителни промени в левкоцитната формула и еритроцитите.
  3. Разпространената форма по време на анализа ще даде по-изразени горепосочени отклонения.
  4. Когато възпалителният процес се успокои или се възстанови, червената кръв се връща към нормалното, броят и съотношението на левкоцитите се възстановяват.
  5. Не е открита неактивна форма на белодробна туберкулоза при общ кръвен тест.

Ключът към успешното лечение е ранното откриване на туберкулоза, а общият кръвен тест е метод, който позволява да се открие навреме началото на латентен възпалителен процес. И въпреки че анализът не се счита за специализиран метод на изследване, те могат в кратък период от време да обхванат голяма маса хора. При идентифициране на аномалии в типичната клинична картина се определя специфичен анализ за туберкулоза и флуорография.

Кой каза, че е невъзможно да се лекува туберкулоза?

Бяха диагностицирани с туберкулоза. Вие изпълнявате всички предписания на лекаря, но няма възстановяване. От шепа хапчета стомахът боли, преследва слабост и апатия? Може би е време да промените подхода си към лечението.

Лекарите не могат да преодолеят основната причина за Вашето заболяване. Прочетете историята на Елена, която успя да победи туберкулозата без значение какво. Прочетете статията >>

Индикатори на ESR при туберкулоза

Понастоящем, според статистиката, туберкулозата е най-честата болест сред хората. Най-често тази болест засяга децата и сегментите на населението с ниски доходи. Струва си да се отбележи, че всяка година процентът на болните хора се удвоява. Във връзка с това се разработват нови лекарства и методи за лечение на туберкулоза.

Основният фактор, допринасящ за развитието на туберкулозата, е намаляването на имунитета, който може да бъде причинен от замърсяването на околната среда. Диагнозата на това заболяване може да се направи с помощта на тестове и по много други начини.

Анализът на кръвта за туберкулоза е основният индикатор за определяне на заболяването при хората. Туберкулозата е опасна инфекциозна болест. Струва си да се отбележи, че в още по-пренебрегван етап заболяването е много трудно да се лекува, затова е много важно болестта да се забелязва във времето и да се започне подходящо лечение в болницата.

Начини на заразяване с туберкулоза

Заболяването има механизъм за предаване на капчици въздух. По този начин, инфекцията може да възникне в резултат на получаване на патогена в тялото през лигавицата. В допълнение, туберкулозата може да се предава от болна майка до развиващ се плод.

В почти всички случаи туберкулозата действа върху дихателната система. Отделя се екстрапулмоналната форма на заболяването (засяга храносмилателната система, централната нервна система, нарушава зрителната функция, ставите, урогениталната система).

Основният източник на заболяването е микобактериум - пръчката на Кох. Той засяга белите дробове, кожата, костите и много други органи. По правило туберкулозата може да доведе до увреждане или дори до смърт на човек. Въпреки това, ако болестта се диагностицира възможно най-рано, тогава тя е доста податлива на лечение.

Индикатори на ESR при туберкулоза

Кръвен тест за дефиницията на туберкулоза показва клиничния ход на възпалителния процес. Обикновено скоростта на утаяване на еритроцитите е: при мъжете 1-10 mm / h, при жени 2-15 mm / h.

Причиняващият агент, който влиза в човешкото тяло, причинява увреждане на тъканите и органите на различни системи. Включително променящи се кръвни показатели. Така че, когато се зарази с пръчка, се наблюдава много силно увеличение на скоростта на утаяване на еритроцитите. Също така броят на белите кръвни клетки се увеличава, тъй като възпалителният процес се извършва в тялото.
По правило туберкулозата не предизвиква значителни промени в еритроцитите. Развитието на малка анемия и нисък хемоглобин може да се развие само със значителна загуба на кръв. По този начин, туберкулозата се придружава от излишък на ESR, който е много по-висок от нормалната стойност.

симптоми

Основните симптоми на туберкулозата включват:

  1. Повишена телесна температура;
  2. Нощни изпотявания;
  3. Поява на недостиг на въздух;
  4. Суха, силна кашлица с храчка (може да има кръвни ивици);
  5. Обща умора;
  6. Остър загуба на тегло;
  7. Бърза умора;
  8. летаргия;
  9. агресивност;
  10. Липса на апетит;
  11. Болка в гърдите.

Децата, за разлика от възрастните, са най-податливи на туберкулозна инфекция. Ето защо е необходимо редовно да изследвате детето си и да проведете тест за идентифициране на пръчката на Кох. Навременната диагноза ви позволява да постигнете положителен резултат без сериозни последици.

Някои хора имат силна имунна система. В този случай симптомите на заболяването започват да се появяват само в късните етапи. С отслабения имунитет се появяват признаци в самото начало на заболяването.
Туберкулозата се развива бавно и на етапи:

  • Първична форма.
    Развива се веднага след инфекцията. Основните симптоми на този етап са разширяването на лимфните възли.
  • Латентна (скрита форма).
    Началото на заболяването се характеризира с липсата на симптоми. Освен това те се появяват под формата на специфични болки по време на дишане и кашляне, липса на апетит, прекомерно изпотяване, бърза умора. Такава форма може да се счита за незаразна.
  • Отворете формуляра.
    Най-сериозната форма на болестта. За лечението е необходимо да се предпази болното лице от други в затворени лечебни заведения. Това е необходимо, за да се гарантира сигурността на околните.
  • Вторична форма.
    Той се наблюдава в резултат на повторна инфекция.

Диагностика на туберкулозата

Откриването на заболяването е сложно поради сходството на първите симптоми с хроничен бронхит. Водеща роля при диагностицирането на туберкулозата играят навременното приемане на тестове от потенциални пациенти. Така че, ако пациентът е заподозрян в туберкулоза, се извършва изследване на храчките. За целта се събират храчки през деня и се изпращат в лабораторията за откриване на микобактерии.

Струва си да се отбележи, че диагнозата на туберкулозата има други методи за изследване на пациентите.

Най-ефективните начини за диагностициране на заболяването са:

  1. Б / х кръвен тест;
  2. Изследване на урина;
  3. Анализ на храчките;
  4. Mantoux тест, Pirke;
  5. CT сканиране (компютърна томография);
  6. Серологично изследване на кръвта (ELISA, PCR);
  7. бронхоскопия;
  8. биопсия;
  9. Плеврална пункция;
  10. рентгеново;
  11. Флуороскопия.

Трябва да се отбележи, че туберкулозата се придружава от повишаване на концентрацията на холестерол, лизозим, пикочна киселина и мед в серума. На тази основа всички промени в туберкулозата могат да бъдат много специфични.

Всяка форма на заболяването се характеризира с поток, тежест, диагноза и лечение. Ето защо, когато се появят първите симптоми, трябва незабавно да се консултирате с лекар и да не се самолекувате. Тъй като може само да влоши ситуацията и да влоши състоянието си.

В момента има много лекарства, които ефективно се борят с причинителя на туберкулозата. Водещата роля при възстановяването на човек се проявява чрез навременна диагностика и компетентна терапия. Също така, общото състояние на пациента зависи от процеса на възстановяване след заболяването. По този начин, ако се спазват всички медицински препоръки, рискът от повторна инфекция може да бъде намален.

Лабораторна диагностика на туберкулоза

Туберкулозата е заболяване, което е лесно да се диагностицира в съвременните условия и научните постижения. Лабораторната диагностика на туберкулозата е от основно значение за други диагностични методи, второ само за рентгенови методи на изследване.

Клиничен кръвен тест

При пациентите с туберкулоза промените в общия анализ на кръвта не са патогмонични. При ограничени и неактивни форми на туберкулоза, еритроцитът е хипохромен в нормално количество. Когато масивни инфилтрати или случаен пневмония, докато разпространението на случаен лимфаденит, специфични чревни лезии, както и за голям белодробна или постоперативно кървене и бележка erythropenia microcytosis, oligohromaziyu, polihromaziyu. Макроцитозата и особено poikilotsitoz се срещат много по-рядко, обикновено с тежка анемия. Брой на ретикулоцитите в стъпка туберкулоза компенсира варира от 0.1 до 0.6%, с subcompensated - от 0.6 до 1.0% и 1% се характеризира с декомпенсирана ретикулоцити.

Когато туберкулоза в някои случаи може да има умерено левкоцитоза (до 15 хиляди от левкоцити.), По-малко радиация, които се срещат в 2-7% от пациентите с ограничени и лесен процес срещащи се форми и в 12.5% ​​- от деструктивни и прогресивно белодробна туберкулоза,

Най-честите промени се появяват в левкоцитната формула. Маркирайте както относителната, така и абсолютната неутрофилия, умерено изместване на левкоцитната формула вляво преди промиелоцитите. Миелоцитите са много редки в случай на безплодна туберкулоза. Увеличаването на броя на неутрофилите с патологичен гранулат в хемограма на пациент с туберкулоза винаги показва продължителността на процеса: при пациенти с тежка туберкулоза почти всички неутрофили съдържат патологична зрялост. Когато туберкуларната епидемия престане, ядреното преместване сравнително бързо се доближава до нормалното. Патологичната зрялост на неутрофилите обикновено продължава по-дълго от другите промени в хемограмата.

Съдържанието на еозинофилите в периферната кръв също варира в зависимост от процеса и фаза алергично състояние организма. Техният брой намалява до aneozinofiliya в тежка и продължителна огнище на заболяване и, обратно, се увеличава инфилтрати на резорбция и плеврален излив, както ранните форми на първична туберкулоза.

Повечето форми на първична туберкулоза се съпровождат от лимфопения, която понякога се наблюдава от няколко години, дори след белези на специфични промени. Вторичната туберкулоза във фазата на обостряне в зависимост от тежестта на процеса може да бъде придружена или от нормален брой лимфоцити, или от лимфопения.

Той заема специално място определяне на еритроцитите процент утаяване Допълнителни тестове за оценка на туберкулозен процес (ESR) със стойност на оценката на процеса на туберкулоза поток и идентифициране на неговите активни форми. Увеличение на ESR показва наличието на патологичния процес (инфекциозно-възпалителни, гнойни септичен, хемобластоза, лимфом и др.) И е показателно за неговата тежест, но нормални нива не ESR винаги означава липса на патология. Ускоряване на утаяване на еритроцитите допринасят за увеличаване на нивата на глобулини, фибриноген, холестерол в кръвта, и да се намали вискозитета на кръвта. Бавно утаяване на еритроцитите характеристика на условия придружено хемоконцентрация, увеличаване на съдържание на албумин и жлъчни киселини.

Хемограмата при пациенти с туберкулоза се променя по време на лечението. Хематологичните смени изчезват по-бързо, толкова по-успешно е терапевтичната намеса. Все пак, трябва да се има предвид ефектът върху хемопоезата на различни антибактериални лекарства. Те често причиняват еозинофилия, в някои случаи - левкоцитоза и по-често левкопения до агранулоцитоза и лимфоидно-ретикуларна реакция. Систематичният хематологичен контрол и правилният анализ на получените данни са от съществено значение за оценяване на клиничното състояние на пациента, динамиката на процеса и ефективността на използваното лечение.

Клиничен анализ на урината

При туберкулозата на пикочната система анализът на урината е основният лабораторен диагностичен метод. Можете да наблюдавате левкоцитурия, еритроцитурия, протеинурия, хипоизостенурия, туберкулоза микобактериум, неспецифична бактериурия.

Левкоцитурия - най-честият симптом на туберкулоза на отделителната система преди химиотерапия и не е специфично само в изключителни случаи, като например пълен заличаване на лумена на уретера. тест Nechyporenko (определяне на броя на левкоцитите в 1 мл урина) спомага за по-обективна оценка степен левкоцитурия nefrotuberkuloze на с, и в някои случаи да се идентифицира при нормално урината. Въпреки това, ние трябва да помним, че leykotsitouriya може да бъде остър и хроничен пиелонефрит, цистит, уретрит, камъни в бъбреците и уретера.

Eritrotsiturii. както и левкоцитурия. се считат за един от най-честите лабораторни признаци на туберкулоза на пикочно-половата система. Честотата на хематурията зависи от разпространението на процеса, той се увеличава, тъй като деструктивният туберкулозен процес се развива в бъбреците. Еритроцитурия без левкоцитурия е по-характерна за ранните стадии на бъбречна туберкулоза. Хематурия, която преобладава над левкоцитурия, е важен аргумент в полза на туберкулозата на бъбреците при диференциацията му с неспецифичен пиелонефрит.

Биохимичен кръвен тест

При туберкулозата промените в някои биохимични параметри зависят главно от фазата на процеса, усложненията и различните съпътстващи заболявания. При пациенти с неактивна туберкулоза на белите дробове и други органи, общите протеинови и протеинови фракции на кръвния серум са непроменени и определят тяхното нормално съдържание.

При остри форми на заболяването, както и при обостряне и прогресия на хроничните форми на туберкулоза, коефициентът на албумин-глобулин намалява.

Съществено при оценката на функционалното състояние на органичен увреждане на черния дроб и в туберкулоза и неговите усложнения е определянето на серумния общ и директен билирубин, AST (ACT), аланин аминотрансфераза (ALT). Динамично определяне на нивото на аминотрансферазите. билирубин в лечението на болни от туберкулоза, особено при по-тежки форми, - задължителен компонент на биохимична разглеждането на пациенти с туберкулоза и се провежда на месечна база.

Оценката на функционалното състояние на бъбреците включва определянето на серумния креатинин и изчисляването на скоростта на гломерулна филтрация, съгласно формулата Cockcroft-Gault. Изчисляването на скоростта на гломерулна филтрация, използвайки пробата на Reberg, дава по-малко точни резултати.

Основната цел на динамичните биохимични изследвания на пациентите с туберкулоза е да се следи хода на процеса, навременното откриване на страничните ефекти на лекарствата и адекватната корекция на възникващите хомеостатични разстройства.

Прилагане на биохимични методи за изследване при екстрапулмонарна туберкулоза

Най-информативен индикатор е съдържанието на туберкулостеаринова киселина в биологичните течности, но определението му е свързано с технически трудности (необходимостта от газова хроматография и масспектрометрия).

Перспективно измерване на активността на аденозин деаминаза - ензим, определен в течности: синовиална, перикардна, асцитна или спинална. Основните производители на аденозин деаминаза са лимфоцити и моноцити. Определяне на аденозин деаминаза активност в биологични течности улеснява диагнозата на туберкулоза синовит, туберкулоза на лимфните възли, туберкулозен менингит, туберкулозен serozity.

Някои биохимични показатели, дължащи се на тяхната неспецифичност, се определят само в биологични флуиди, близки до фокуса на лезиите. Измерете нивото на показателите в отговор на подкожно или интрадермално инжектиране на туберкулин (обикновено преди и 48 и 72 часа след това). След това, степента на нарастване на нивото на маркера (в%) се изчислява спрямо първоначалното ниво.

Оптимално определяне в урината на активността на органоспецифичен ензим трансманидаза, чийто външен вид се забелязва, когато са засегнати бъбреците от различен характер. Проучването на трансамидиназата е оправдано само при условия на подкожно инжектиране на туберкулин, за да се изостри локалното възпалително процеси. Определете първоначално активността на трансамидина в урината и 24-72 часа след въвеждането на 50 ТЕ туберкулин. Разширяването на ферментацията в два пъти и повече позволява в 82% от случаите да се разграничи активната туберкулоза на бъбреците от обостряне на хроничен пиелонефрит.

При туберкулоза на женски полови органи, концентрациите на хаптоглобин и малонен диадехид в кръвта се определят при условия на провокативен туберкулинов тест. Подкожно инжектираният туберкулин в доза от 50 TE и 72 часа по-късно извърши второ биохимично изследване. В случай на етиология на туберкулозата, степента на повишаване на нивото на хаптоглобин е не по-малко от 28%, а нивото на малондиалдехид е 39% или повече. Определя се също така активността на аденозин деаминаза в перитонеална течност, получена от пространството на Дъглас. Препаратът се преразглежда 72 часа след интрадермалното инжектиране на туберкулин в дози от 0,1 TE и 0,01 TE в прожекцията на вътрешните генитални органи в предната коремна стена. В полза на туберкулозния процес увеличаването на активността на аденозин деаминазата е 10% или повече в сравнение с първоначалната.

Когато се засяга окото, се изследва фокалната реакция, която се появява в окото в отговор на антигенната стимулация. Не е желателно да се развие изразен отговор, придружен от намаляване на зрителните функции. Тъй като оценката на минималното фокусно реакции често са трудно да се препоръча сключването на обективиране е ориентирана успоредно, и от степента на повишение на серумния хаптоглобин, или аденозиндеаминаза.

Всички биохимични изследвания трябва да се извършват заедно с други методи.

Изследване на системата за коагулация на кръвта

Значение на състоянието на изследвания на системата за съсирване на кръвта на туберкулоза се дължи на присъствието на брой пациенти с белодробна туберкулоза хемоптиза или белодробна хеморагия, както и кръвосъсирване усложнения в хирургичното лечение на туберкулоза. В допълнение, латентният поток на интраваскуларна хемокоагулация, който естествено придружава туберкулозата, засяга хода на заболяването и ефективността на химиотерапията.

При пациенти с белодробна туберкулоза разпространение на ексудативна възпаление компонент на наблюдавания спад на кръвното антикоагулантна активност. При пациенти със слабо разпространение на специфична лезия в белите дробове с преобладаване на продуктивен кръвосъсирване интраваскуларна възпалителен компонент изрази леко. При пациенти с белодробна туберкулоза с хемоптиза и белодробна система кръвоизлив състояние съсирването на кръвта е различна: при пациенти с ниска загуба на кръв при gemoptoe на височина или веднага след прекратяването му има рязко покачване на кръвосъсирването способност поради тежка интензификация на trombinoobrazovaniya като същевременно се поддържа повишено "структурни" съсирване. При пациенти с масивна загуба на кръв наблюдава потенциал намаляване на кръвосъсирването за сметка на намаляване на концентрацията на фибриноген. Действие на фактор XIII, брой на тромбоцитите. В етапа на хирургично лечение при пациенти с ограничени форми на белодробна туберкулоза със значителни нарушения настъпва система хомеостаза. Пациенти с масов процес при изпълнение на pnevmon- или plevropnevmonektomii често развиват DIC, което може да бъде под формата на "втори болестта."

За да се следи състоянието на кръвосъсирването при пациенти с белодробна туберкулоза трябва да се извърши определяне на активираното парциално тромбопластиново време (аРТТ), фибриноген, време на тромбин, протромбиновото индекс и времето на кървене и време на съсирване.

Хормонални изследвания

Последните експериментални и клинични наблюдения показват наличието на хормонални промени в състоянието в определена туберкулозен пневмония. Доказано е, че коригирането на дисфункция на хипофизата, на надбъбречните жлези, хипофизата, щитовидната системи и панкреаса функция във връзка с терапия анти-TB допринесе за активирането на фиброгенеза и ремонт на специфично възпаление локус.

Функционалното състояние на хипофизната и щитовидната система се оценява от съдържанието на трийодотиронин в кръвния серум (Т3), тироксин (Т.4), тироиден стимулиращ хормон на хипофизно тяло (TTG). Установено е, че субклиничен хипотиреоидизъм се открива в 38-45% от пациентите с белодробна туберкулоза, и най-често се диагностицира с разпространени и фибро-кавернозен процес форми. Със същите формуляри нивата като T3,и Т.4, и има дисбаланс на тези хормони под формата на увеличение на съотношението Т4/ Тите.

Адренокортикален функция се оценява от нивото на кортизол в кръвния серум, и ендокринната функция на панкреаса - концентрация на имуно-реактивна инсулин. В острата фаза на инфекция увеличава необходимостта от ендогенния кортизол и инсулин. Хиперинсулинемията е показан на телесна тъкан инсулинова резистентност, което е типично за всеки активен възпалителен процес, особено специфичен. Определяне glyukokortiko idnoy-надбъбречната функция с активна белодробна туберкулоза разкрива присъствието на Кушинг при повечето пациенти. Нормални нива на концентрация на кортизол в кръвта на пациента с инфекциозно възпаление на остър период следва да се разглеждат като относителна недостатъчност на глюкокортикоидния функция на надбъбречната кора, която може да служи като основа за поставяне на дозите подходяща заместваща терапия на глюкокортикоиди.

Почти една трета от пациентите с белодробна туберкулоза може да се установи, че нивото на Инс-Лин има доста ниска и в близост до долната граница на нормата, а 13-20% се наблюдава значителна хиперинсулинизъм. И двата относителни хипо- и хиперинсулинизъм са високи рискови фактори за развитието на нарушения на метаболизма на въглехидратите в различна степен. Тези промени във функционалната активност на В клетките на панкреаса изискват редовно проследяване на гликемията при пациенти с туберкулоза и навременна профилактика на захарен диабет. В допълнение. това служи като допълнителна обосновка за целесъобразността от използването на физиологични дози инсулин в комплексната терапия на туберкулозата.

Най-общо, по-ниски нива на хормони на щитовидната жлеза и техните дисбаланс хиперкортизолемия и хиперинсулинизъм-голям обхват при пациенти с тежко протичане на туберкулозен процес, с богат увреждане на белите дробове и тежки симптоми на туберкулоза интоксикация.

Микробиологична диагностика на туберкулоза

Необходими са и микробиологични изследвания за идентифициране на пациенти с туберкулоза, проверка на диагноза, наблюдение и корекция на химиотерапия оценка на резултатите от лечението, с други думи, тъй като регистрацията на туберкулоза на пациента, преди да го извадите от Регистъра.

Всички епидемиологични програми и проекти се основават на оценка на броя на бактериалните екскременти, които не могат да бъдат направени без използване на лабораторни методи за откриване на туберкулоза на микобактерии. В проучване на така наречената неорганизирана популация процентът на бактериални нашественици достига 70 или повече, което прави лабораторните методи достатъчно ефективно средство за идентифициране на туберкулозни пациенти сред тази група от населението.

Традиционните микробиологични методи за диагностициране на туберкулозата са бактериоскопични и културни изследвания. Съвременните методи разглеждат отглеждането на mycobacterium tuberculosis в автоматизирани системи, определянето на PCR. Всички тези методи обаче задължително се съчетават с класическите бактериологични методи.

Събиране на диагностичен материал

Ефективността на лабораторните изследвания зависи до голяма степен от качеството на диагностичния материал. Съответствието с правилата за събиране, съхранение и транспортиране на диагностичния материал и точното прилагане на алгоритъма за оценка на пациента влияе пряко върху резултата и осигурява биологична безопасност.

За изследване на туберкулоза се използват най-различни материали. Поради факта, че TB logkih- най-честата форма туберкулозни лезии, основният материал за изследване помисли храчките и други видове подвижен трахеобронхиални: секрети на горните дихателни пътища, получени след аерозолно вдишване: бронхиални промивки; бронхоалвеоларни изплаквания; материал, получен от бронхоскопия, и интрапулмонарно транстрахеално биопсии от бронхиални аспирати, ларингеални тампони, ексудати от рани и намазки др.

Ефективността на изследванията се увеличава, ако се извършва контролирано събиране на материал от пациент. За тази цел се разпределя специално оборудвана стая или се купуват специални кабини. Събирането на материали е опасна процедура, поради което е необходимо да се съберат материали за изследване, спазвайки правилата за инфекциозна безопасност.

Материалът за изследване на Mycobacterium tuberculosis се събира в стерилни бутилки с плътно завити капачки, за да се предотврати замърсяването на околната среда и да се предпази събраният материал от замърсяване.

Флаконите за събиране на диагностичен материал трябва да отговарят на следните изисквания:

  • трябва да бъдат направени от устойчив на удар материал;
  • лесно се разтапя по време на автоклавирането;
  • да има достатъчно количество (40-50 ml):
  • имат широк отвор за събиране на храчки (диаметър не по-малък от 30 mm);
  • да бъде лесна за работа, прозрачна или полупрозрачна, за да можете да оцените количеството и качеството на събраните проби, без да отваряте капака.

За постигане на оптимални резултати от изследването трябва да се спазват следните условия:

  • Съберете материала преди началото на химиотерапията;
  • материалът за изследването трябва да бъде събран преди сутрешното приемане на храна и лекарства;
  • за изследвания е желателно да се съберат най-малко 3 проби от сутрешния храм. Съберете слюнката в продължение на 3 последователни дни;
  • събраният материал трябва да бъде доставен в лабораторията възможно най-скоро:
  • в случаите, когато е непосредствено невъзможно да се достави материалът в лабораторията, той се съхранява в хладилник при температура на въздуха 4 ° C в продължение на не повече от 48 часа;
  • При транспортиране на материала е необходимо внимателно да се следи целостта на флаконите.

Правилно събраните храчки са мукозни или мукопурулентни. Оптималният обем на изследваната храчка е 3-5 ml.

Слюнката се събира под наблюдението на медицински специалист. Лицата, отговорни за събирането на храчки, следва да следват прилагането на определени правила:

  • Трябва да се обясни на целите на изследването на пациента и необходимостта да плащам не слюнка или насофаренгеално слуз, и съдържанието на дълбоко дихателните пътища. Това може да бъде постигнато в резултат на продуктивна кашлица, която настъпва след няколко (2-3) дълбоки вдишвания. Също така трябва да предупреди пациента, че той трябва първо да изплакнете устата с преварена вода за отстраняване на по-голямата част вегетиращи устната микрофлора и хранителни отпадъци, което пречи на храчки;
  • медицински работник, участващ в събирането на храчки, в допълнение към хавлия и шапка, трябва да носи маска, гумени ръкавици и гумена престилка;
  • стои зад пациента, се препоръчва да се съхраняват бутилката възможно най-близо до устните си и веднага го отделя храчки плюене, тъй като по този начин е необходимо да се осигури, че въздушният поток е насочен далеч от доставчика на здравни грижи:
  • След приключване на събирането на храчки, здравният работник трябва внимателно да затвори флакона с капак и да оцени количеството и качеството на храчките, събрани. След това бутилката се етикетира и поставя в специална опаковка за транспортиране до лабораторията.

Ако пациентът не произвежда храчки, в нощта преди и рано сутринта в деня на събиране на материала е необходимо да му даде отхрачващо :. екстракт от корените на бяла ружа (mukaltin), бромхексин амброксолът и т.н. - или да приложите дразнещо вдишване помощта на апаратура, инсталирана в стаята, за да се съберат храчки. Материалите, събрани по този начин, не подлежат на опазване и трябва да бъдат разгледани в деня на събирането. За да се избегне "избиването" в лабораторията в посока, трябва да направи специален знак.

Ако тази възможност не се извършва разследвания микробиологичните събрани диагностичен материал, за да бъде в центъра доставят в лабораторията, където операторът трябва да спаси материал между доставки в хладилника или чрез използване на консерванти. Доставяйте материали в лабораторията в транспортни кутии, които могат лесно да бъдат дезинфекцирани. Всяка проба трябва да бъде снабдена с подходящ етикет и цялата партида трябва да бъде попълнена с придружаващ формуляр.

Режими и честота на изследване на пациентите

При първоначалното, така нареченото диагностично изследване на пациента за туберкулоза е необходимо да се изследват най-малко 3 части на храчката в продължение на 2 или 3 дни. събрани под наблюдението на медицинския персонал, което увеличава ефективността на микроскопията.

Първичният скрининг за туберкулоза трябва да се извършва от всички медицински диагностични институции в системата на здравеопазването. Напоследък бяха организирани така наречените центрове за микроскопия, оборудвани със съвременни микроскопи и оборудване за епидемична безопасност, на базата на клинични диагностични лаборатории за подобряване на ефективността на първоначалния преглед.

При обекти против туберкулоза се използва скринингов тест, който включва изследване на храчки или друг диагностичен материал най-малко три пъти за 3 дни. По време на лечението микробиологичните изследвания се провеждат редовно поне веднъж месечно по време на интензивната фаза на химиотерапия. При прехода към фазата на лечение проучванията се провеждат по-рядко - с интервал от 2-3 месеца, докато честотата на проучването е намалена до две.

Характеристики на колекцията от диагностичен материал за екстрапулмонарна туберкулоза

Фокус патологичен материал с извънбелодробни форми на туберкулоза - Mycobacterium туберкулоза ниска концентрация в него, което изисква по-чувствителни методи за микробиологични изследвания, предимно за посяване техники среда.

При туберкулозата на пикочно-половата система урината е най-достъпният учебен материал. Събирането на урина трябва да се извършва от специално обучена медицинска сестра.

Външните гениталии се измиват с вода със сапун или слаб разтвор на калиев перманганат. Външното отваряне на уретрата се третира внимателно. В стерилен флакон се събира средна част от утринната урина: при мъжете естествено при жените се използва катетър. Урината от бъбречния таз е събрана в стерилни епруветки с катетеризация на един или два бъбрека, в последния случай - задължително отделно от всеки бъбрек. Малко количество от тази урина се центрофугира, утайката се изследва.

При мъжете, спермата, точковите тестиси, тайната на простатата се подлага на центрофугиране, за да се получи утайка. При всяка локализация на специфичен процес в гениталната област при мъжете, простатата масаж може да стимулира отделянето на секрети, съдържащи mycobacterium tuberculosis.

Менструалната кръв при жените се събира чрез смучене или с капачка на Кафка. Полученият материал се освобождава от червените кръвни телца, измива се с дестилирана вода, последвано от центрофугиране. Утайката се изследва.

Разпределенията от цервикалния канал на матката се събират в някакъв капацитет или капачка на Кафка, т.е. желателно е да се натрупат 1-2 ml патологичен материал.

Материал, получен от оперативни интервенции на бъбреците, гениталиите. с биопсии, отстраняване от ендометриума, хомогенизиране. За да направите това, тя се поставя в стерилен хоросан и се раздробява със стерилни ножици. Към тази суспензия се добавя стерилно речен пясък в количество, равно на теглото си и след това покрити с 0,5-1.0 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид, и всичко се стрива до маса пастообразна с добавянето на изотоничен разтвор на натриев хлорид (4-5 мл). След това масата се оставя да се утаи за 1-1.5 минути, супернатантата се изследва.

Туберкулоза на костите и ставите. Точковият (гной на абсцеси), получен със стерилна спринцовка, се поставя в стерилни чинии и веднага се доставя в лабораторията. Стерилна пипета, предварително намокрена с стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид, вземете 2-5 мл гной, тя се прехвърля към флакон перли се добавя и друг 2-3 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид. Бутилката се затваря с корк и се разклаща в шега-апарат за 8-10 минути. Разглежда се хомогенизираната суспензия.

При фистулни форми на остеоартикуларна туберкулоза се прави гной от фистулата. Широкото изхвърляне се събира директно в епруветка. В случаите, постно пиорея фистула промива със стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид и промивните води се събират в епруветка, или част от тампон импрегнирани с гной изпратени за анализ.

Хирургически материал, получен по време на операция на костите и ставите може да се състои от гнойни-некротичен маси, гранулати, белег, синовиалните мембрани костна тъкан и други субстрати. Неговото лечение се извършва, както при туберкулозата на бъбреците.

Микробиологичното изследване на синовиалната течност в 3% разтвор на натриев цитрат (съотношение 1: 1) за предотвратяване на коагулацията се извършва веднага след пункцията.

Туберкулоза на лимфните възли. Изследва се и гнила, извлечена по време на пункцията на лимфните възли. като гной на абсцесите. Изследвани са тъканите на лимфните възли, получени по време на хирургични интервенции, биопсии, както при други форми на туберкулоза.

Изследването на масите на изпражненията върху mycobacterium tuberculosis е изключително рядко, поради почти пълната липса на положителни резултати.

Микроскопия на микобактериите

Микроскопията на храчките е сравнително бърз, лесен и евтин метод, който трябва да се използва във всички случаи със съмнение за туберкулоза. В допълнение, това проучване се провежда, за да се оцени ефективността на химиотерапията и да се установи възстановяването или неуспеха на лечението, ако няма тест за култура.

Използват се два метода за микроскопско изследване:

  • метод на директна микроскопия, когато се приготвя смазка директно от диагностичния материал;
  • метод за микроскопия на утайка, приготвена от материал, третиран за обеззаразяване, за култивиране.

Първият метод се използва в лабораториите, където се извършват само микроскопски изследвания (клинични и диагностични лаборатории от общата медицинска мрежа).

Най-добрите резултати от микроскопското изследване се получават чрез концентриране на диагностичния материал (например чрез центрофугиране).

За откриване на микобактериум туберкулоза с вероятност от 50% при извършване на микроскопията, 1 ml от храчките трябва да съдържа повече от 5000 микробни клетки. Храчките на пациенти с белодробни форми на туберкулоза обикновено съдържат значително количество кисело-бързи бактерии, което им позволява да бъдат надеждно открити чрез бактериоскопия. Диагностичната чувствителност на този метод може да бъде подобрена чрез изследване на няколко проби на храчката от един пациент. Негативният резултат от бактериоскопския преглед не изключва диагнозата туберкулоза, тъй като храчките на някои пациенти съдържат по-малко микобактерии, отколкото могат да бъдат открити с микроскопия. Лошата подготовка на слюнката на храчките може също да доведе до отрицателен резултат от бактериоскопския преглед.

Най-разпространеният метод за откриване на киселинно-бързи микобактерии в оцветяването е цвета според Tsiol-Nelsen. Методът се основава на фуксин на проникване карбол в микробната клетъчна мембрана, съдържаща восъчно липиден слой с едновременно излагане на топлина и силно действие ецващ фенол. Следващото обезцветяване на смолата с 25% разтвор на сярна киселина или 3% солна киселина води до промяна в цвета на всички неактивни структури. Изцветните елементи на намазката се оцветяват с 0,3% разтвор на метиленово синьо. Mycobacteria не вземат обикновени анилинови бои, в резултат на киселина бацили са оцветени червено-червено, и други микроби и клетъчни елементи - в синьо.

За намазки оцветяват с Ziehl-Nelsenu използва светлина бинокулярен микроскоп с масло потапяне леща (90- или 100-кратно увеличение) и окуляра на увеличение 7- или 10-кратно. Разгледайте 100 полета на зрението, което е достатъчно, за да идентифицирате единичните микобактерии в смазката. В случай, че резултатът от това изследване е отрицателен, за потвърждение се препоръчва да видите още 200 зрителни полета. Запишете резултатите, като посочите броя на откритите киселинно-бързи бацили (KUM).

В допълнение към тази техника се използват цветни флуорохроми за луминисцентна микроскопия, което позволява постигането на най-добри резултати. Използването на този метод увеличава ефективността на микроскопията с 10-15%. Когато лекуват микобактерии с луминесцентни багрила (аурамин, родамин и др.), Тези вещества също се свързват с восъкоподобните структури на микробната клетка. При облъчване на цветни клетки с вълнуващ светлинен източник (определен спектър на ултравиолетово лъчение), те започват да светят с оранжева или яркочервена светлина върху черен или тъмнозелен фон. Поради високата яркост и контраст на видимото изображение, цялостното увеличение на микроскопа може да се намали 4-10 пъти, зрителното поле се разширява и времето за гледане на препарата намалява. Заедно с това, благодарение на много по-голяма дълбочина на полето, можете да увеличите комфорта на изследването.

Когато флуоресцентната микроскопия се използва за сканиране на една и съща област, петна изразходва значително по-малко време от светлинния микроскоп на оцветяването на Tsiol-Nelsen. Ако гледате работен ден микроскоп 20-25 на ударите, а след това с помощта на флуоресцентна микроскопия, тя може да изследва за същото време повече от 60-80 екземпляра. Опитен микроскоп знае, че цветът на клетките със смес от ауламин и родамин е малко по-специфично за киселинно-бацили, които в този случай са златни пръчки. Сапрофитите са боядисани в зеленикав цвят.

Друго важно предимство на метода на флуоресцентна микроскопия - възможността за откриване променена Mycobacterium, губи под влиянието на неблагоприятни фактори, включително интензивна химиотерапия, kislotousotoychivosti собственост и не се открива във връзка с това оцветяване Ziehl-Nelsenu.

Недостатъците на метода на флуоресцентната микроскопия са относително високата цена на микроскопа и неговата работа. Въпреки това, в централизирани или други големи лаборатории, където товарът надвишава нормата на 3 лабораторни техници, работещи с три конвенционални микроскопа, е по-евтино да се използва един флуоресцентен микроскоп.

Бактериоскопските методи имат доста висока специфичност (89-100%). Около 97% от положителните резултати, получени по всеки метод на микроскопия, се потвърждават недвусмислено от резултатите от сеитбата.

Трябва да се отбележи, че в микроскопско изследване на петна на патологична материал не може да установи вида на киселина бацили засича. метод микроскопия позволява да даде становище само на присъствието или отсъствието на киселина в получаването на микроорганизми, което може да бъде обяснено с наличието в природата на голям брой морфологично подобни на туберкулоза Mycobacteria сложни nontubercular киселина резистентни микроорганизми.

Резултатите от микроскопията се оценяват в полуколичествени единици.

За да могат да се сравнят резултатите от различните методи на микроскопия, се въвеждат емпирични коефициенти. Например, за да се сравнят резултатите от намазки оцветяват с флуоресцентни багрила, изследвания данни светлина микроскоп (1000 пъти увеличение), е необходимо да се разделят на броя на киселина бацили открива чрез флуоресцентен микроскоп, съответния коефициент при 250-кратно увеличение - до 10, 450 пъти - до 4, с 630 пъти - до 2.

Характеристики на микроскопията за екстрапулмонарна туберкулоза

Извършва се директна микроскопия, както и микроскопията на петна, приготвени след обогатяване, последвани от оцветяване с Tsiol-Nelsen или луминисцентни багрила. Директната микроскопия на намазките е неефективна поради ниската концентрация на микобактерии в материала и поради това е по-разумно да се използват методи за обогатяване. Най-ефективно е центрофугирането. Ако биологичният материал е вискозен, центрофугиране се прилага едновременно с втечняване и хомогенизиране на материала, който се провежда, използвайки високоскоростни центрофуги с центробежна сила от 3000 г и хипохлорит решения. Други методи за обогатяване, като микро флотация, понастоящем не се използват поради образуването на биологично опасни аерозоли.

Културният метод за диагностициране на туберкулозата

Методът на сеитба или методът на култивиране е по-чувствителен от смазочната микроскопия и има редица предимства пред последната. Той позволява откриването на няколко десетки жизнеспособни микобактерии в тестовия материал и има голяма диагностична стойност. Това е особено важно при изследване на материала от ново диагностицирани или лекувани пациенти, които отделят малко количество микобактерии.

В сравнение с микроскопия, културата може да се увеличи броят на откритите случаи на туберкулоза с повече от 15-25%, както и проверка на туберкулоза в по-ранните етапи, когато заболяването е все още реагира добре на лечението. Много важно предимство на теста за култура е възможността да се получи култура на възбуда, която може да бъде идентифицирана и изследвана по отношение на чувствителността към лекарството, вирулентността и други биологични свойства.

Недостатъците на методите на отглеждане включват тяхната продължителност (времето на изчакване на материалите достига 10 седмици). по-високи разходи, сложност при обработката на диагностичния материал.

Принципи на предварителното лечение на диагностичния материал

Конвенционалните микробиологични методи не могат да се използват при провеждането на изследвания за туберкулоза. Това се дължи на факта. че микобактериум туберкулоза расте много бавно и повечето клинични проби съдържат бързо развиващи се пиогенни и гнилостни микроорганизми, гъбички. Техният бърз растеж върху богати хранителни среди пречи на развитието на микобактерии и не позволява изолиране на причинителя на туберкулозата, така че диагностичният материал трябва да бъде предварително обработен преди засяването. В допълнение, микобактерията, освободена от дихателните пътища на пациента, обикновено е заобиколена от голямо количество слуз, което затруднява концентрацията. В тази връзка, преди засаждането на храчки и други подобни материали, тяхното втечняване, е необходимо обеззаразяване.

Всички детергенти и деконтамини имат повече или по-малко изразен токсичен ефект върху микобактериите. В резултат на обработката до 90% от микобактериите могат да умрат. За да се запази достатъчно от микобактериална населението, съхраняващи необходимостта да се използват техники за обработка, които позволяват, от една страна, за подтискане на бързо растящи пиогенни бактерии и гниещи, и от друга - да се запази жизнеспособността на микобактерии, налични в материала.

В зависимост от материала, неговата степен на хомогенност и замърсяване за предварителна обработка, използвайки различни обеззаразител: слюнка - 4% разтвор на натриев хидроксид, разтвори trohzameschonnogo натриев фосфат 10%, бензалкониев хлорид, тринатриев фосфат, NALC-NaOH (N-ацетил-Ь-цистеин натриев хидроксид) при крайна концентрация от 1% NaOH, в урината и други течни материали - разтвор на сярна киселина 3%, за замърсени проби, мазнини, съдържащ материали - разтвор на оксалова киселина до 5%. В допълнение, в някои случаи се използват ензими, повърхностноактивни вещества (детергенти). Приложение Tween детергенти и някои други микобактериални смърт е придружен от по-малко клетки (40-50% оцелее). Те обаче могат да се използват само за течни материали. Най-голямото разпространение в света е NALC-NaOH. произведени в комплекти. Този метод позволява да се разпределят повече от 85% от популацията на микобактериални клетки. Обеззаразяване tkanesoderzhaschih твърди трудно да предполагам, тъй като степента на дисперсия на материала по време на хомогенизиране трудно. Например, лечение биопсии на лимфни възли често придружени от повишена честота на замърсяване с външни флора. В този случай може да се използва 1% етоний.

Нехомогенният материал се хомогенизира със стъклени перли в присъствието на дезактиватори. Течните материали се пре-центрофугират и се обработва само утайка.

Техника на сеитба и инкубация

След предварителната обработка материалът се центрофугира, като по този начин се утаяват микобактериите и се увеличава тяхното съдържание в утайката ("обогатяване на утайките"). Получената утайка се неутрализира и инокулира (инокулира) с гъста хранителна среда или епруветки с течна (полуликвидна) среда. От останалата част от утайката се приготвят петна за микроскопско изследване. Техниката на засяване трябва да предотвратява кръстосаното замърсяване на диагностичния материал.

За надеждно клинично тълкуване на резултатите от микробиологично изследване трябва да се спази следното правило: Проучванията на микроскопия и култура трябва да се извършат паралелно от същата проба от диагностичния материал.

Инокулираните тръби се поставят в термостат при 37 ° С в продължение на 2 дни в хоризонтално положение. Това осигурява по-равномерно абсорбиране на материала в хранителната среда. След 2 дни епруветките се прехвърлят във вертикално положение и се затварят херметически с гумени или силиконови щепсели, за да се предотврати изсушаването на засетите носители.

Реколтата се съхранява в термостат при 37 ° С в продължение на 10-12 седмици с редовно седмично гледане. За всяка визуализация се записват следните параметри:

  • периодът, наблюдаван визуално от деня на засяване;
  • темп на растеж (брой CFU);
  • замърсяване на културата с външна микробна флора или гъбички (такива тръби се отстраняват);
  • липса на видим растеж. Тръбите са оставени в термостата до следващото гледане.

Хранителни среди

Различни хранителни среди се използват за отглеждане на микобактерии; гъста, полутечна, течна. Обаче, никоя от известните хранителни среди няма свойства, които да гарантират растежа на всички микобактериални клетки. Във връзка с това се препоръчват 2-3 хранителни среди от различен състав, които да се използват едновременно за повишаване на ефективността.

Като стандартна среда за първична изолация на причинителят на туберкулозата и да се определи неговата лекарствена чувствителност СЗО препоръчва Lowenstein-Jensen среда. Това е гъста среда на яйцеклетка, на която растежът на микобактериите се получава на 20-ия и 25-ия ден след засяването на бактериоскопски положителен материал. Културите от бактериоскопски отрицателен материал изискват по-дълъг инкубационен период (до 10-12 седмици).

В нашата страна, предложените E.R. Фин яйчна среда Finn-II. Тя се различава с това, че вместо L-аспарагин е натриев глутамат, други начини за иницииране синтезата на аминокиселини на микобактерии. Ръст се появява в тази среда, малко по-рано, но честотата на изолиране на микобактерии от 6-8% по-висока, отколкото в околната среда Lowenstein-Jensen.

За да се подобри ефективността на бактериологичен диагноза на извънбелодробна туберкулоза е подходящо да се включат в сложни хранителни среди модифицирани среда Finn-II. За да се ускори растеж в хранителна среда, Finn-II се прилага допълнително натриев тиогликолат 0.05%, намаляване на концентрацията на кислород. За защита на ензима от Mycobacterium системи токсични продукти на липидната пероксидация в хранителна среда Finn-II прилага антиоксидант α-токоферол ацетат в концентрация от 0.001 мкг / мл. Засяване диагностичен материал, произведен по стандартния метод.

В руските лаборатории за борба с туберкулозата се използват други модификации на гъсти хранителни среди; предложи G.G. Mordovian хранителна среда "New", разработена от V.A. Анични хранителни среди А-6 и А-9 и др.

Поради факта, че в процеса на химиотерапия е увреждане на различни метаболитни системи на микробни клетки, някои микобактериална население губи способността да се развиват нормално в конвенционална хранителна среда и изисква осмотично балансиран (или полутечни) културална среда.

Оценка и записване на резултатите от засяването на диагностичния материал

Някои щамове и видове микобактерии растат бавно, растежът може да се появи дори до 90-ия ден. Броят на такива култури е малък, но това прави възможно издръжливостта на културите в термостат за 2,5-3 месеца.

Вирулентна Mycobacterium туберкулоза култура обикновено растат върху твърда среда под формата на яйце R форма колонии от различни размери и видове. Колониите са сухи, набръчкани, слонова кост, леко пигментирани. В други среди колонията на mycobacterium tuberculosis може да бъде по-влажна. След курс на химиотерапия или по време на лечението могат да се разпределят гладки колонии с влажен растеж (S-форми).

При изолиране на култури се използва набор от специални изследвания, за да се разграничи Mycobacterium tuberculosis от не-туберкулозни микобактерии и киселинно устойчиви сапрофити.

Положителен отговор се дава след задължителното микроскопско изследване на оцветени с Ziehl-Nelsenu намазка колонии. В случай на растеж на микобактерии в намазка откриване ярко червени пръчки, разположени поединично или в групи, образуващи натрупвания под формата на филц или оплетка. При млади култури, по-специално изолирани от дългосрочно лечение на пациенти с химиотерапия, микобактерии различават експресирания полиморфизъм, докато присъствието на прътовидния, заедно с къси, почти coccoid или продълговати версии, които приличат на мицел.

Скоростта на растеж на микобактериите е показана със следната схема: (+) - 1-20 cfu in vitro (слаба бактериална екскреция); (++) - 20-100 CFU in vitro (умерена бактериална екскреция); (+++) -> 100 CFU in vitro (изобилна бактериална екскреция). При лабораторната диагноза на туберкулозата не е достатъчно да се отговори дали микобактериумът се открива по един или друг начин. да имат подробно разбиране за степента и естеството на микобактериалната популация, нейния състав и свойства. Тези данни ни позволяват правилно да интерпретираме състоянието на процеса, да планираме тактиката и да коригираме своевременно лечението.

През последните години, за ускоряване на растежа на микобактериални медийна култура се предлагат на агар с различни добавки за растеж на базата на и използването на специални газови смеси. За микобактериална растеж на тези среди докато култивиране създаде атмосфера с повишено съдържание на въглероден диоксид (4-7%). За тази цел, специално CO2-инкубатори. Най-развитите автоматизирани системи за култивиране на микобактерии: MGIT-BACTEC-960 и MB / Bact.

Една такава система - MGIT система (растеж микобактерии показва тръба), което се отнася до развитието на високите технологии и е предназначен за бързо бактериологично диагностика на туберкулоза и Mycobacterium чувствителност към първа линия лекарства, както и някои от втора линия лекарства. MGIT фокусирана върху използването му като част от VASTES-960 на устройството. Микроорганизмите се култивират в специални епруветки с течна хранителна среда на базата на модифицирана среда Middlebrook 7H9-. За стимулиране на растеж на микобактерии и потискащи външен микрофлора добавки растеж използва добавка растеж MGIT растеж и Панта сместа антимикробни средства.

Регистрация на растежа на микроорганизми се извършва оптично. Тя се основава на флуоресценция, която се появява, когато консумацията на кислород микобактериални мл по време на растежа. Киселинно-flyuorohromny багрило, съдържащо се в долната част на специални епруветки и се покрива със слой от силикон. Възпроизвеждането микобактерии води до намаляване в количество кислород в тръбата и намаляване на концентрацията, която причинява повишаване на флуоресценцията, която става видимо при облъчване с ултравиолетова светлина тръби и автоматично регистриран фоточувствителен вграден уред VASTES-960. Интензитетът на луминисценцията записва в растежа единици (GU- единици растеж). Те растеж, записана в компютъра, където те могат да се запазва автоматично. Компютърен анализ на кривите на растежа може да предостави информация за наличието на голямо разнообразие от микобактериални басейни, включително nontubercular, а също така помага да се оцени качествата на растеж на микобактерии.

В резултат от времето на появата на такива системи микобактериална растеж е значително намален, средно 11 дни VASTES-960 и 19 дни на MB / Bact до 33 дни на стандартната твърда хранителна среда. Трябва да се отбележи, че тези системи изискват висококвалифициран персонал. Посевния материал за течни носители ще бъде придружен от засяването на Lowenstein-Jensen среда, играе ролята на дубльор в случаи, когато други носители на Mycobacterium туберкулоза не позволяват растеж.

Определяне на лекарствената чувствителност на микобактериите

Определяне на обхвата и степента на чувствителност на микобактерии за анти-TB лекарства има важни клинични последици, както и епидемиологично Оценка на резистентна туберкулоза. В допълнение, мониторинг на лекарствена резистентност ви позволява да се оцени ефективността на програма за борба с туберкулозата като цяло, като неразделна показател за работата на всички компоненти на контрола на туберкулозата дейности.

Множество и синхронизиране на чувствителността към наркотици:

  • преди началото на лечението веднъж за определяне на стратегията и тактиката на лечението:
  • когато са изолирани от болни култури от различни материали (храчка, течност BAL, урина, ексудати, течност и др.), всички изолирани щамове се изследват:
  • в края на интензивната фаза на лечение при отсъствие на клинична и радиологична динамика:
  • ако е необходимо да се промени схемата на лечение в следните случаи:
    • липса на слюнка на храчки;
    • повторно изолиране на културата след отрицателна хрема;
    • драстично увеличение на броя на CMU в тампона след първоначалния спад. Известно е, че щамовете на mycobacterium tuberculosis, които са хетерогенни по отношение на чувствителността към лекарството, са изолирани от материала от пациент с туберкулоза. Чувствителността на щамовете към антитуберкулозни лекарства може да се различава в обхвата на лекарствата, степента, честотата и степента на възникване на резистентност.

Степента на лекарствена резистентност на Mycobacterium туберкулоза се определя в съответствие с установените критерии, които са насочени към клиничната значимост и стабилност зависи от активността на анти-TB наркотици, фармакокинетиката, концентрацията в лезията. максималната терапевтична доза и т.н.

Определянето на лекарствената чувствителност на микобактериите понастоящем се извършва чрез микробиологични методи:

  • Абсолютните концентрации (метод на разреждане върху гъста или течна хранителна среда),
  • пропорции,
  • коефициент на съпротивление.

Обикновено стабилност се проявява като визуално наблюдавана растеж колония на Mycobacterium туберкулоза, но има техники, които индуцират ранните етапи на растеж в делящи се клетки на Mycobacterium под формата на цветна реакция. Тези методи съкращат времето за тестване от 3-4 до 2 седмици.

Както обединени в Русия е бил удължен, препоръчани от метода на химиотерапия в комитета, който на абсолютните концентрации, което е от методологична гледна точка, най-просто, но изисква висока точност и стандартизация на лабораторни процедури. DST се състои от набор от тръби с хранителна среда, модифицираните анти-TB лекарства. Комплектът се състои от 2-3 тръби с различни концентрации на всеки от лекарства, използвани, един контролни тръби без лекарство за околната среда и една епруветка, съдържаща 1000 мкг / мл натриев Sali tsilovokislogo или 500 мкг / мл paranitrobenzoynoy киселина nontubercular за откриване на растеж на микобактерии.

За да се приготви комплект от среди с препарати, се използва модифицирана среда на Levenstein-Jensen (без нишесте), която се излива в колби. Във всяка от колбите се прибавя специфичен обем подходящо разреждане на антитуберкулозния препарат. Съдържанието на колбите се размесва добре, излива се в епруветки и се сгъва наклонено в продължение на 40 минути при температура 85 ° С. Препоръчва се бобината да се навива в електрически пренавивач с автоматично регулиране на температурата. Сряда с лекарства против туберкулоза

Едната серия може да се съхранява в хладилник при 2-4 ° C в продължение на 1 месец, като препаратите от втория ред - не повече от 2 седмици. Съхранението на средата с препарати при стайна температура е неприемливо. При приготвянето на разтвори на лекарства против туберкулоза се взема предвид тяхната активност, като се изчислява концентрацията, коригирана за молекулното тегло на неспецифичната част на препарата, чистотата и т.н. За да се определи лекарствената чувствителност, се използват само химически чисти вещества.

Принципът на метода е да се определи концентрацията на антитуберкулозно лекарство, което инхибира растежа на значителна част от микобактериалната популация. Ако е направено правилно, този метод има добра надеждност.

Преди теста е необходимо да се увери, че изолираната култура на mycobacterium tuberculosis няма външна микрофлора. От културата на микобактерии в 0.9% разтвор на натриев хлорид получава хомогенна суспензия, съдържаща 500 милиона микробни органи в 1 мл (оптична мътност стандарт 5 единици). Получената суспензия се разрежда с 0.9% разтвор на натриев хлорид (1:10) и към всяка епруветка от комплекта културална среда се добавят 0.2 ml суспензия. Заразените Епруветките се поставят в инкубатор при 37 ° С и се поддържа в хоризонтално положение в продължение на 2-3 дни, за да се равномерно инокулира със суспензия от Mycobacterium туберкулоза на скосен повърхността на средата. Епруветките след това се прехвърлят във вертикално положение и се инкубират в продължение на 3-4 седмици. Резултатите се записват след 3-4 седмици.

Тъй като времето на отделянето на екскреция от клиничния материал върху хранителната среда е поне 1-1.5 месеца, резултатите от определянето на чувствителността на лекарството по този метод могат да бъдат получени не по-рано от 2-2.5 месеца след засяването на материала. Това е един от основните недостатъци на метода.

Интерпретирайте резултатите от определянето на чувствителността на микобактериите към лекарството въз основа на определени критерии. На твърда среда култура се счита чувствителни към концентрацията на лекарството, която се съдържа в средата, ако броят на колониите от микобактерии, отгледани ин витро с това лекарство не повече от 20 е с изобилен растеж в контролната тръба без лекарства. Само в присъствието на повече от 20 колонии, културата се счита за устойчива към тази концентрация. На практика, когато се получават растежни резултати в епруветки близки до 20 cfu. е необходимо да се уведоми клиничната единица, че чувствителността или съпротивлението в този случай са гранични, тъй като понякога тя може да обясни размитата динамика на клиничните показатели.

За различни лекарства се установява определена концентрация, при която се наблюдава възпроизводството на критичния дял на микобактериалната популация. Тези концентрации се наричат ​​"критични". Като критерий за стабилност се използва растежа на популацията от микобактерии върху хранителна среда с препарат при критична концентрация.

При практиката на домашна туберкулоза при определяне на лекарствената резистентност те не се ограничават до определяне само на критични концентрации. Това се дължи на факта. че нивото на удължено определение на лекарствена резистентност позволява на клинициста за по-точно позициониране тактика на химиотерапията използване на знания за усилване действието на лекарствени комбинации, кръстосват очаква резистентност или да прилага група по-ефективни лекарства, използвани анти-TB лекарства.

Методът на абсолютната концентрация е най-простият, но също така е най-чувствителен към грешките, които се правят, когато се извършва. По-надеждни, особено при определянето на чувствителността към вторите медикаменти и общата извън Русия е методът на пропорциите. Той взема предвид недостатъците на метода на абсолютната концентрация, но при изпълнение е по-труден.

Методът е много подобен на метода на абсолютната концентрация. Подготовката на епруветките с лекарства се извършва по същия начин. както при метода на абсолютната концентрация. Обаче дозата за семената на суспензията от mycobacterium tuberculosis се намалява с коефициент 10. който елиминира честотата на спонтанната резистентност на някои щамове на mycobacterium tuberculosis към такива лекарства, като Етамбутол, Протионамид, Капреомицин. Като контрола се използват 2 или 3 епруветки с доза за семе, равна на епруветките, последователно разредени 10 и 100 пъти. Критерият за стабилност е делът на визуално наблюдавания растеж на mycobacterium tuberculosis. За лекарства от 1-ва серия критерият за стабилност е излишъкът от растеж от 1% от първоначалната популация за лекарствата от втория ред - увеличение с 1 или повече от 10% от началната, в зависимост от избраната критична концентрация.

През 1997 г. работна група на Световната здравна организация и Международния съюз за установяване на добра туберкулоза TB лекарствена резистентност е направила корекции на тези критерии, като предлага доказана резистентност микобактерии, които растат върху твърда яйце медии Lowenstein-Jensen при следните концентрации:

  • дихидрострептомицин - 4 μg / ml;
  • изониазид 0,2 μg / ml:
  • рифампицин 40 μg / ml:
  • Етамбутолът е 2 μg / ml.

През 2001 г. бяха предложени критични концентрации за следните лекарства от втора линия (за критичен дял от 1%):

  • капреомицин - 40 mcg / ml;
  • протионамид - 40 мкг / мл;
  • канамицин - 30 ug / ml;
  • виомицин - 30 mcg / ml;
  • циклосерин 40 ug / ml;
  • аминосалицилова киселина - 0,5 μg / ml;
  • олоксацин - 2 μg / ml.

Резултатите от растежа се оценяват след 4 седмици като предварителна и след 6 седмици култивиране - като последната.

За да се определи чувствителността на лекарството към пиразинамид, който се използва широко в съвременната химиотерапия за туберкулоза, препоръчителната критична концентрация е 200 μg / ml. Въпреки това все още няма общоприет метод за определяне на лекарствената резистентност към това лекарство върху твърда хранителна среда, тъй като неговата антибактериална активност се проявява само в кисела среда (рН ° С;

  • отсъствие на пигментация (слонова кост);
  • белязан с киселинно бърз цвят;
  • положителен тест за ниацин;
  • положителен тест за нитрат редуктаза;
  • липса на термостабилна каталаза (68 ° С).
  • Отсъствието на растеж върху среда на Levenstein-Jensen, съдържаща:
    • 1000 μg / ml натриев салицилат,
    • 500 μg / ml паранитробензоена киселина,
    • 5% натриев хлорид:
  • растеж в присъствието на 1-5 ug / ml тиофен-2-карбоксилна киселина.
  • Значението на диференциацията на изолирани микобактерии ще се увеличи значително с увеличаването на честотата на регистриране на случаи на ХИВ / СПИН, свързани с туберкулоза или микобактериоза. Понастоящем няма абсолютна сигурност за готовността на практическите регионални лаборатории да изпълняват правилно този обем работа.

    Имунологична диагностика на туберкулоза

    Има редица от универсални явления, наркотици и имунологични изследвания, които първоначално са били открити в нея туберкулоза или модели на имунния отговор на микобактерии. Те включват BCG туберкулин, такова явление като кожен DTH (туберкулин - Pirquet и Манту реакция), реакцията на подкожната туберкулинови сенсибилизирани животни (Koch явление). Едно от първите антитела при инфекциозни заболявания също е открито при туберкулоза. Разбира се, колкото по-дълбоко разбиране на добри механизми за туберкулоза имунитет и техния генетичен контрол, толкова по-голяма може да бъде използването на имунологични методи и лекарства, които влияят върху имунната система, за решаване на практически проблеми, свързани с туберкулозата.

    Най-важният и труден практически проблем в момента се счита за откриване на туберкулоза в процеса на масов скрининг на населението. Независимо от многобройните съобщения за "успехи" (на ограничен материал), няма подходящ имунологичен метод (възпроизводим в "всички ръце") и лекарство, подходящо за тази цел.

    Имунологичните методи, по-специално серологичните изследвания (определяне на антигени, антитела) и пробите, предизвикващи туберкулин, се използват широко в клиничната практика.

    На първо място сред имунологичните изследвания, използвани при диференциална диагноза, има серологични методи - определянето на антигени и антитела в различни среди на тялото.

    Специфичността на антителата срещу туберкулоза на микобактерия зависи от антигените, използвани в имунологичния тест. Предлага се значително количество антигени, като първият от тях е туберкулиновият PPD:

    • PAP и други сложни препарати от течната култура;
    • ултразвукова дезинтеграция;
    • Екстракт от тритон и други сложни препарати от клетъчни стени;
    • 5-антиген (Daniel);
    • 60-антиген (Coccito);
    • lipoarabinomannan;
    • корд-фактор (трехалоза-6,6-димиколат);
    • фенолни и други гликолипиди;
    • липополизахарид;
    • фибронектин свързващ антиген;
    • протеини (най-често рекомбинантни); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 CDA и др.

    Като резултат от години на изследвания от руски и чуждестранни учени разкри основните закони и ефективността на антитела серологично диагностициране на туберкулоза: колкото по-сложен антиген, по-висока чувствителност и по-ниски спецификата на теста. Специфика в различните страни варира в зависимост от популацията на М. туберкулозна инфекция и nontubercular микобактерии от извършване БЦЖ ваксинация и други. При деца, информационното съдържание на serodiagnosis е по-ниска, отколкото при възрастни. При първичната туберкулоза (по-често децата), определението за IgM е по-информативно. с вторичен IgG. При HIV-инфектирани пациенти, информативната стойност на серодиагниза при определяне на антителата се намалява. определяне ефективност на антитела зависи от броя на "клиничните аспекти": Метод активност (в присъствието или отсъствието на "изолиране" микобактерии присъствие гниене на кухини, степента на инфилтрация), разпространението на процеса, продължителността на потока.

    Чувствителността на метода на ензимен имуноанализ (ELISA) е около 70%. Недостатъчната ефективност на проучването се дължи на неговата малка специфичност. Преди това се обсъжда възможността за използване на серологичен скрининг при високорискови групи, особено при лица с изменения в белите дробове след туберкулоза.

    За да се засили спецификата ELISA продължи търсенето на по-специфични антигени, включително тези, произведен чрез генно инженерство: (. Виж по-горе) ESAT-6, и др.. Използване на строго специфични антигени (38 Ша, ESAT) увеличава специфичност. но значително намалява чувствителността на анализа. Заедно с IFA (системи експериментален лабораторните изследвания. Напр Pathozyme ELISA комплект) също осигурява комплекти с латерална имунохроматографски филтруване (Mycodot), както и други подобни тестове (точка за анализ на мембраната) с визуална оценка на резултата от теста. По време на тези тестове, анализът се провежда за 10-30 минути; те не изискват специално оборудване, те изискват визуална оценка на резултатите, която е свързана с определена субективност. Тези методи имат приблизително еднакви характеристики на чувствителност и специфичност (съответно 70% и 90-93%) като традиционните ELISA.

    Използването на методи за имунен анализ има определена стойност като допълнителна, взета предвид в комплекса на използваните методи, в диференциалната диагностика на туберкулозата, особено при диагностицирането на нейните екстрапулмонарни форми. Най-ефективният метод на ELISA е в диагностиката на туберкулозния менингит в изследването на цереброспиналната течност. В този случай чувствителността на анализа е 80-85%, а специфичността е 97-98%. Съществуват данни за ефективността на откриването на антитела срещу туберкулоза на микобактерии в слъзната течност при диагностицирането на туберкулозен увеит.

    Индукция на синтеза на гама-интерферон in vitro

    Гама интерферонът (IFN-y) е специфичен имунен защитен фактор, осъществен чрез активиране на ензимните системи на макрофагите. Индуцирането на IFN-y синтеза от сенсибилизирани Т-лимфоцити предизвиква тяхното взаимодействие с антигени на микобактерии.

    Като антигени, използвани като туберкулинов PPD. и специфичните антигени, получени чрез генно инженерство, по-специално антигени ESAT-6 (ранно секретирани антиген с молекулно тегло 6 Ша) и CFP-10 (култура филтрат протеин 10 kDa). Генетично инженерство или рекомбинантни антигени липсват в клетките на BCG ваксината и други микобактерии. Когато се използва туберкулин, резултатите от индукционния тест IFN-y са сравними с резултатите от туберкулиновия кожен тест (директна корелация). Когато се използват генетично конструирани антигени, резултатите от теста са по-специфични и не зависят от предишната BCG ваксинация. При тестване на ваксинирани лица, които не са имали контакт с туберкулозна инфекция, специфичността на теста е 99%. Чувствителността на теста при пациентите с туберкулоза варира от 81 до 89%.

    Тестове и диагностични инструменти са разработени на базата на краткосрочни култивиране на клетки или мононуклеарни клетки от цяла кръв, изолирани от кръвта с антигените на Mycobacterium туберкулоза ин витро с последващо определяне на концентрацията на IFN-γ или чрез преброяване на броя на Т-лимфоцити, които синтезират IFN-γ. Концентрацията на интерферон синтезира ин витро се определя чрез ELISA, използвайки моноклонални антитела, свързващи се на IFN-γ. След това, като се използва стандартна калибриране на IFN-γ определя от неговата концентрация в епруветката или ямките на плаката.

    При провеждането на теста Elispot броят на Т-лимоцитите, синтезиращи IFN-y. се отчитат на повърхността на плака, покрита с антитела срещу IFN-y.

    разработчиците Diagnosticum на IFN-γ ин витро чрез индукция, който е одобрен от Агенцията за лекарствата и продукти в САЩ, се твърди, че един тест е невъзможно да се направи разлика между латентна туберкулоза инфекция от активна туберкулоза. Следователно, в региони с високо ниво на инфекция, тестът не е директно диагностичен. Въпреки това, в нашата страна, тя може да се използва за разграничаване на туберкулозна инфекция при деца от постваксиналния алергии, както и за оценка на нивото на специфичен имунитет в процеса на лечение.

    Понастоящем се проучва вътрешната тестова система за определяне на индуцирането на IFN-y синтез от специфични туберкулозни антигени in vitro.

    Имунен статус и ход на туберкулоза, имунокорекция

    В процеса на лечение на туберкулоза при хора, има промени в антигенезата и състоянието на имунната система.

    Данните за промените в ексудатите и тъканите са до голяма степен противоречиви. Единственото нещо, което може да се отбележи с основателна причина е, че при туберкулозни грануломи като правило се откриват значителен брой активирани Т-лимфоцити.

    Има смисъл да се обсъждат още две разпоредби, които са необходими, за да се разбере ролята на имунологичните механизми при лечението на туберкулоза при хората:

    • Пациентите със СПИН имат особено висока честота на резистентност към множество лекарства;
    • с многократна лекарствена резистентност (и при отсъствие на HIV инфекция), имунитетни разстройства (особено Т-клетъчната връзка) са особено значими.

    Когато туберкулоза широко се прилагат различни методи за имуномодулация: тя е предимно средства, действащи предимно на имунитета на Т-клетки и система от мононуклеарни фагоцити (тимусни хормони, изофорон, likopid, polioksidony и др.). както и цели (атенюирани) микобактерии и техните компоненти.

    Молекулярно-биологична диагностика на туберкулоза

    За молекулярни методи биология в диагностицирането на инфекциозни заболявания включват, главно, методи базирани на манипулиране с геномната материал на бактериални и вирусни патогени да се идентифицират специфични генетичен материал - ДНК сегменти, които имат нуклеотидна последователност, специфична за определен вид или патогенни щамове да анализира специфичен ДНК последователности на гените, които определят чувствителността на патогена на специфични лекарствени вещества, но също така да анализира функционалните активността на определени гени на патогена. Молекулярно биологични техники са широко в научните изследвания и практическо приложение в диагностиката и мониторинг на различни бактериални и вирусни инфекции след отваряне през 1985 г., Carrie Myullisom (носител на Нобелова награда. 1989) полимеразна верижна реакция.

    Принципи и възможности на метода на полимеразна верижна реакция

    PCR позволява да се амплифицира (умножи) in vitro нуклеотидна последователност (ДНК фрагмент на патогена) в продължение на няколко часа в милиони пъти. Реакцията в присъствието на единични ДНК вериги определя изключително висока чувствителност на анализа.

    Нуклеотидната последователност на някои региони в ДНК веригата определя генетичната идентичност на микроорганизма, което обяснява високата специфичност на PCR.

    Стойността на тази техника за откриване и изследване на характеристиките, причинени от Mycobacterium туберкулоза биологични характеристики на микроорганизми, имащи много бавен растеж: време за удвояване на Mycobacterium туберкулоза ДНК при култивиране е 12-24 часа.

    Принципът на метода на PCR се състои в усилване - многократно, милиони пъти. умножаване на участъците от специфична ДНК последователност в епруветков микроком, по време на цикличен рецидив на следните три реакционни етапа, всеки от които преминава в различен температурен режим:

    • Етап I - денатуриране на двойноверижна ДНК при нагряване с отклонение на нейните вериги;
    • II етап - комплементарно свързване (хибридизация) на праймери (първични олигонуклеотиди) с крайни участъци от строго специфични вериги, избрани за мултиплициране на ДНК фрагмента;
    • Етап III - завършване на ДНК фрагментната верига с помощта на термостабилна ДНК полимераза.

    За амплификация in vitro трябва да има молекули на матрична ДНК. четири вида деоксинуклеозид трифосфати (нуклеотиди), съдържаща подходящи азотни бази: аденин (А), тимин (Т), гуанин (G), цитозин (С); изкуствено синтезирани първични олигонуклеотиди (праймери), състоящи се от 18-20 базови двойки; термостабилна ензимна ДНК полимераза с температурен оптимум 68-72 ° С и магнезиеви йони.

    Специфичността на PCR зависи от избора на ДНК фрагмента. В съответствие с това се синтезират олигонуклеотиди от фланкно семе. Специфичността на хибридизацията и завършването на ДНК веригата се дължи на принципа на комплементарност на следните двойки азотни бази: аденин-тимин, гуанин-цитозин.

    За определяне на геномна туберкулозен микобактерии комплекса най-ефективно цел усилване в повечето системи за изпитване, избрани ДНК фрагмент на IS6110, които в повечето щамове на Mycobacterium туберкулоза геном има значителен брой (10-20) на повторения, която осигурява, заедно със специфичност, висока чувствителност на анализа. В същото време, Mycobacterium туберкулоза щамове, описани с малък брой повторения или не IS6110 фрагмент.

    Изолиране на ДНК молекули от биологична проба

    За PCR ДНК молекулата на патогена трябва да бъдат изолирани от биологичен материал в минимален обем, с минимално количество ДНК nespepificheskoy и различни ензим - ДНК полимераза.

    Приготвянето на проби трябва да се извършва при условия, които предотвратяват кръстосаното замърсяване на пробите от изолираните молекули на ДНК. За тази цел е необходима предварителна обработка на помещението с ултравиолетови лъчи, подове и работни повърхности на бюра и уреди с хлор-съдържащи разтвори. Също така задължително да използвате чисти ръкавици, епруветки за еднократна употреба и върхове за автоматични пипети.

    За изолиране на ДНК от Mycobacterium туберкулоза от клинични проби (цереброспинална течност, бронхиална промиване) не съдържа голям брой клетки, клетъчни остатъци, или техни соли, достатъчно, за да се центрофугира пробата на 3-4 хиляди. Rpm, се добавят към разтвора на утайката 20-30 мкл 2% Triton Х-100 и се загрява при 90 ° С в продължение на 30 минути.

    За получаване на храчки проби трябва да бъде ефективна втечняване, който обикновено се използва в продължение на 4% разтвор на натриев хидроксид и N-ацетил-Ь-цистеин (NALC) в количество от 50-80 мг на пробата - в зависимост от вискозитета на пробите. Разтворът NALC трябва да се приготвя ex tempore или NALC прах може да бъде добавен директно към пробата. След втечняване пробите трябва да се центрофугират в продължение на 15 минути при 3.5-4000 об / мин (3000 g) в 50 ml флакони с винтова капачка, т.е. при същите условия, които се препоръчват за подготовката на храчките.

    За извличането на ДНК от метода на пелети се използва най-често се основава на използването на 5-6 моларен разтвор на гуанидин изотиоцианат лизисен реагент като микропорести частици и силициев оксид ( "диатомит") сорбиращ ДНК молекула. Неспецифичните вещества, включително възможни инхибитори, след това се промиват в 2,5 моларен разтвор на гуанидин изотиоцианат и разтвор на етанол, след което ДНК молекулата се десорбира във вода, и тези проби се използват за извършване на PCR. За да се опрости технологията на изолиране на ДНК "диатомит" често се заменя с магнитни микрочастици, покрити с силициев оксид. Така за отлагане на частиците се използва вместо центрофугиране специална магнитна решетка за микроепруветки.

    В Русия е разработен оригинален метод за имуномагнитно отделяне на микобактерии с последваща екстракция на ДНК на патогена. За Mycobacterium туберкулоза имуномагнитно сепариране използване ferroparticles размер на 3-5 микрона, покрита със силициев двуокис, към който са прикрепени чрез химическо свързване поликлонално (заек) антитела към Mycobacterium туберкулоза. Пробите от храчка след алкален лизис се неутрализират с кисел разтвор на трис-НС1 и се инкубират с имуномагнитен сорбент. След това, имуноферо-частичките се събират с магнитна пръчка със заменяем връх, прехвърлят се в микротубус и се утаяват. 20-30 вземане мкл 2% разтвор на Triton Х-100 и се загрява в продължение на 30 минути при 90 ° С супернатантата се използва като ДНК матрица за PCR анализ.

    Трудният проблем е изолирането на ДНК от Mycobacterium tuberculosis от биопсични екземпляри. За ензимна биопсия, ензимната протеиназа К се използва в крайна концентрация от 200-500 mg / l при температура 56 ° С в продължение на една нощ. Освен това е използван един от известните методи. Излишъкът от неспецифична ДНК в PCR анализа на биопсии често предизвиква инхибиране на реакцията, което изисква повторна екстракция на ДНК.

    Методи за откриване на резултати

    След завършване на реакцията, амплифицираните ДНК фрагменти на патогена се идентифицират чрез различни методи.

    Методът за гел електрофореза е добре известен. Така получава ДНК фрагмент се идентифицират чрез положителна контрола, съдържаща желания специфичен фрагмент на ДНК или известни предварително размера (брой базови двойки) фрагмент, който се определя чрез стандартен молекулен маркер.

    В присъствието на специфично багрило, етидиум бромид се включва в двойноверижна ДНК. синтезираният ДНК фрагмент се открива като лента, осветена под действието на ултравиолетовия лъч.

    Размерът на ДНК фрагмента, определен чрез електрофореза от разстояние от началото, трябва да съответства на известен маркер за молекулно тегло или положителна контрола.

    Други методи за определяне на PCR резултати на базата на хибридизация на едноверижен PCR продукти с олигонуклеотид, комплементарен към него - ДНК сонда е белязана с биотин, последвано от откриване чрез ензимни реакции, например чрез свързване към стрептавидин-биотин алкална фосфатаза.

    Въз основа на този тип откриване са създадени PCR анализатори, в които откриването на резултатите от PCR се извършва автоматично в резултат на прочитане на оптичната плътност в пробите след проявяването на ензимната реакция.

    Недостатъците на тези методи са възможностите за интралабораторно заразяване с доста къси фрагменти от ДНК молекули. Когато молекулите влизат в нови проби, те стават матрица за PCR и водят до фалшиви положителни резултати.

    В тази връзка, за да се предотвратят неверни положителни резултати, се въвеждат стриктни правила за отделяне и изолиране на помещенията: да се извлече ДНК от биологични проби; помещения за откриване на резултати (електрофореза) от чистата зона. Тези помещения са зона с вероятно замърсяване. Друга изолирана област е чистата стая за въвеждане на ДНК проби, които ще бъдат изследвани в епруветки с реакционна смес за PCR. Накрая се приема, че основното устройство - ДНК-усилвателят - трябва да бъде поставено в отделна, може би офисна стая.

    За да се предотврати замърсяване на продуктите от предходните реакции - някои тест Likon-усилвател PCR система вместо dezoksinukleozidtimidina съдържа dezoksinukleoziduridin, които при ин витро синтеза верига включен вместо в правилно положение, т.е. азотна база тимин присъства в нативната ДНК се заменя с урацил. Урацил ДНК гликозилаза се добавя към реакционната смес за аналита, разрушава само замърсяващи фрагменти деоксиуридин, но не ДНК роден анализира. (I). След нагряване при 94 ° С за да се инактивира ензима и не инхибира PCR амплификация.

    Има система за тестване, базираща се на изотермална амплификация на рРНК, за която първо се извършват обратната транскрипция и синтез на ДНК молекули. който на свой ред е матрица за последващия синтез на РНК молекули. РНК ампликони се откриват, като се използва акридин-оцветена ДНК сонда, когато се хибридизира в разтвор на реакционната епруветка. Този метод, освен високата чувствителност, има предимството да се анализира в една тръба, която предотвратява замърсяването. Според авторите чувствителността на този метод в дихателните проби достига 90% със специфичност от 99-100%.

    Нови методи за откриване се прилагат в PCR в реално време. Тези методи се различават главно по това, че PCR и откриването на резултатите се извършва едновременно в една затворена тръба. Това не само технологично опростява техниката на анализ, но също така предотвратява замърсяването на лабораторните помещения и тестовите проби с продукти от предишна PCR.

    В реално време резултати PCR откриване се дължи на флуоресценцията, получена по време на флуорогенна хибридизационна сонда ДНК с amplifitsi Rui-PCR при специфичен ДНК фрагмент. Структура флуорогенни ДНК сонди, конструирани така, че флуоресцентен маркер, се освобождава в резултат на ензимната реакция или на разстояние от молекула флуоресценция гасител само при специфична хибридизация с желаната ДНК молекула да се амплифицира по време на PCR. Тъй като броят на пробни молекули хибридизират с увеличаването на флуоресценцията е пропорционална на открива нивото на броя на молекулите на амплифицирания продукт. Тъй като при всеки цикъл брой на PCR фрагмент ДНК молекула се умножава по две, броя на цикъла, при която флуоресценция се определя и увеличава обратно пропорционална на броя на ДНК молекули в първоначалната проба. Ако реакцията е да се въведе като калибратор няколко различни известни концентрации на молекули, съответстващи на ДНК фрагмент от Mycobacterium туберкулоза, като се използва компютърна програма може да се изчисли и количеството на геномна ДНК в изпитвания материал.

    Всяка стандартна проба се дублира. Количественият критерий е минималният брой PCR цикли, необходими за началото и растежа на определената флуоресценция. На абсцисата - броят на циклите; ординатата е стойността на флуоресценцията. Концентрациите на ДНК са обратно пропорционални на броя на циклите, необходими за появата на флуоресценция. В дясната колона (21-32) се отбелязват номерата на цикъла за съответните концентрации. Разлики между 10-кратно концентрации на ДНК фрагменти 10 2 -10 6 ml - 3.2-3.4 цикъла. За двама пациенти концентрациите на IS6110 фрагменти са около 10 3 / ml и 10 4 / ml. Като се има предвид броят на повторенията (6-20) на фрагментите, анализирани в генома на Mycobacterium tuberculosis, броят на микобактериите в клиничните проби е съответно около 100 и 1000 клетки.

    Използване на PCR за диагностициране на туберкулоза

    PCR е най-приложим за бърза диагностика на туберкулоза - откриване на Mycobacterium туберкулоза в клинични проби: храчки. бронхиална промивка, плеврален ексудат, урина, гръбначно-мозъчна течност, punctates остеолиза, аспирати женските полови пътища и биопсии различно. В проучването в Холандия са изследвани около 500 храчки и бронхиална промивка проби от 340 пациенти с потвърдена диагноза на белодробна туберкулоза за сравнение на чувствителността на PCR методи, микроскопия и проучвания култура намазки. Анализ на чувствителността беше 92,6,88,9 и 52.4% съответно. Специфичността на всички методи е около 99%.

    Беше сравнена ефективността на откриване на Mycobacterium tuberculosis чрез микроскопия на смазване, засяване на среда на Levenstein-Jensen, тестова система VASTES и PCR анализ. PCR показва чувствителност 74.4%, микроскопия - 33.8%, засяване на гъста среда - 48.9% и VASTES - 55.8%. Средното време за откриване за засяване на среда на Levenstein-Jensen е 24 дни. VASTES - 13 дни, PCR - 1 ден.

    Разглеждат се и възможностите за използване на PCR като чувствителен и бърз метод за мониторинг на ефективността на лечението на туберкулозата.

    Откриване на Mycobacterium туберкулоза ДНК чрез PCR с ефективна химиотерапия определя по-дълго време - средно 1,7 месеца в сравнение с намазка дефинирани под флуоресцентна микроскопия и от 2,5 месеца в сравнение с бактериологично изследване.

    Диагностика на екстрапулмонарни форми на туберкулоза

    Стойност като чувствителен метод PCR е особено голяма за извънбелодробни форми, като образува при тези клинични и рентгенови методи обичайни бактериологични методи за определяне на Mycobacterium туберкулоза в диагностични материали неефективни.

    В изследването на проби от урина PCR резултати са положителни в 16 от 17 пациенти с активна туберкулоза и отрицателен пикочния 4 пациенти неактивен бъбречна туберкулоза и 39 пациенти с урината nontubercular система заболяване.

    Ефективността на PCR анализа в изследването на аспирациите на костния мозък при пациенти с температура от неизвестен произход е демонстрирана в случаите на предполагаема туберкулоза. За да се диагностицира туберкулозен лимфаденит, бяха изследвани 102 аспирационни пункции и биопсичен образец от 67 деца с подозиран туберкулозен лимфаденит при деца. Постигнати са положителни резултати: 71,6% PCR в реално време. флуоресцентна микроскопия - 46.3%. изследване на културата - 41,8%. В проучването на 50 биопсии на лимфни възли при пациенти с "котешка драска" болест, всички резултати са отрицателни. Така се демонстрира 100% специфичност на PCR анализа. В същата работа, с пробивна биопсия на лимфни възли, беше демонстрирана възможността за откриване на M. avium.

    Диагностика на туберкулоза женски полови органи за стерилитет, както е известно, е един от най-трудните диагностични проблеми. Когато се изследва чрез PCR биопсия на ендометриума, ендометриални аспирати течни проби от Дъглас пространство 14 (56%) от 25 пациенти изследват лапароскопски предполагаеми туберкулоза, се получават положителни резултати. Като се използва микроскопия на смазване и култура, съответно се получават 1 и 2 резултата. Тези случаи също са PCR-положителни. Повечето PCR-положителни резултати са свързани с случаи с характерни признаци на туберкулоза според хистологичното изследване; по-малък брой - с подозрение за туберкулоза според лапароскопски данни. Само един положителен PCR резултат се получава при липса на данни за лапароскопска туберкулоза.

    При диагностициране на екстрапулмонарни форми на туберкулоза, клиницистите често имат въпрос относно възможността за откриване на патоген при тестването на кръвни проби с PCR метода. Литературните данни показват, че откриването на ДНК от Mycobacterium tuberculosis от кръвни проби е възможно при широко разпространени форми на HIV инфекция. ДНК от mycobacterium tuberculosis се открива само с генерализирана туберкулоза на различни органи при пациенти с трансплантиран бъбрек и имуносупресия.

    Идентификация на видовете микобактерии

    Методът за PCR може да бъде доста ефективно за бързо идентифициране на микобактерии на туберкулозния комплекс и някои видове микобактерии nontubercular след получаване на първоначалното им растеж. В този случай, използването на PCR може да спести 7-10 дни, необходими за последваща култура положителна идентификация. Изследвания PCR е технически много проста, тъй като тя не изисква сложна проба клиничен материал подготовка за постигане на висока чувствителност. В проучването 80 положителни в настоящия тест система (MB Васто. Organon фирма) всички положителни култури на PCR са строго специфични и държани в продължение на 1 ден. За да се идентифицират други видове микобактерии в препарата на ДНК от култура патоген хибридизира със специфични ДНК сонди, белязани с акридин и щамове, открити от появата на хемилуминесценция чрез chemiluminometer или нитроцелулозни ленти с визуална оценка след хибридизация. Използването на такъв комплект идентифицирани ограничен брой видове: Mycobacterium туберкулоза комплекс. М. авиум, М. авиум комплекс, M. kansasii и M. gordonae.

    A.Telenti et al. разработи относително прост и евтин метод за идентификация на вида на клинично важни видове микобактерии от PCR и последващо третиране с два рестрикционни ензими (ензими, имащи свойства нарязани молекула ДНК в специфични точки). ДНК фрагментът се амплифицира. кодираща протеина на топлинния шок (65 Ша), и след това се обработва в резултат PCR ДНК фрагмент от 439 нуклеотидни чифта поотделно два ензима - Bste II и Хае III. След това се анализира с помощта на електрофореза в агарозен гел, получен на два продукта, определяне на техния размер (брой базови двойки), използвайки стандартен набор от ДНК фрагменти (молекулни ДНК маркери) в дължина от 100 до 1000 базови двойки. Във всяка от специфичните видове (М. туберкулоза, М. авиум, М. intracellulare, M. kansasii, M.fortuitum) откриване на два или три ДНК фрагменти с различни размери за всеки рестрикционен ензим. Комбинацията от различни размери на ДНК позволява да се диференцират тези видове помежду си.

    Разработва се технологията на биологичните ДНК микрочипове. който ще помогне за идентифицирането на повече от 100 вида микобактерии в едно проучване.

    Идентифицирането на видовете може да се извърши чрез PCR амплификация на вариабилен регион 16S рРНК последвано от секвениране на ампликони, в сравнение със съответната основна структура, която позволява идентификация на повече от 40 вида микобактерии.

    С помощта на PCR може да се извърши и идентификация на вида в комплекс Mycobacterium tuberculosis, включително диференциация на M. bovis и M. bovis BCG. За целта се анализира наличието или отсъствието на някои гени в геномните региони на RD1. RD9 и RD10. RD1 отсъства при M. bovis BCG, но присъства в вирулентни видове, включително M. bovis.

    Определяне на лекарствената чувствителност на Mycobacterium tuberculosis чрез PCR

    Цели на молекулярни генетични методи за лекарствена чувствителност или резистентност на Mycobacterium туберкулоза намаляване за идентифициране на мутации в специфични нуклеотидни последователности на известни гени. Основни методи се основават или на директен prochityvanii (последователност) на тези последователности след амплификация или хибридизацията на биотин белязан ДНК фрагменти амплифицирани време сонди PCR ДНК. И двете алтернативи включват идентифициране на нуклеотидни замествания в последователностите, които използват ДНК сонди водят до липса или непълна хибридизация към нитроцелулозна мембрана се използва ензим конюгат (стрептавидин-алкална фосфатаза) - Метод липа-Rif-TB.

    Метод за измерване на флуоресценцията в локално фиксирана на microsections ДНК сонди комплементарна познати мутации в PCR амплифицирани генни региони, отговорни за резистентност или на чувствителността спрямо лекарства, наречени mikrobiochipov метод. Основният алгоритъм за извършване на това изследване е както следва. След изолиране на ДНК от клинична проба или култура на микобактерии е необходимо да се провежда PCR амплификация на съответните фрагменти от rpoB ген, отговорен за лекарствена чувствителност към рифампицин или katG и Inha гени, кодиращи протеини на Mycobacterium са отговорни за чувствителност към изониазид. PCR резултати бяха оценени чрез агарозна гел електрофореза, в които потвърждават получаването на подходящи ДНК фрагменти с желаната дължина. След това се извършва на вторият кръг на PCR за въвеждане на флуоресцентен етикет в ДНК. Резултатите от PCR отново се потвърждават чрез гел електрофореза. След хибридизация се провежда (инкубация за една нощ), последвано от промиване на получения материал на биочипа, което е с голям брой, определен в малка стъклена плоча къси ДНК нишки (сонди), които са комплементарни нуклеотидни последователности тип Mycobacterium туберкулоза лекарствената-чувствителен в точките на възможните мутации. както и на мутантните последователности, отговорни за лекарствената резистентност. Местоположение на ДНК проби от чинията - строго определени, както и нивото на флуоресценция се наблюдава при хибридизация да се определи резултата с помощта на специално устройство за четене е инсталиран. В тази връзка резултатите от анализа се определят чрез специална компютърна програма.

    През последните години са разработени алтернативни методи за определяне на лекарствената чувствителност на микобактериална туберкулоза въз основа на PCR технологията в реално време, които дават възможност да се провеждат тези изследвания в тест с затворена тръба.

    На фиг. 13-13 представя резултата от анализа на клиничните култури на mycobacterium tuberculosis при определянето на лекарствена резистентност към рифампицин чрез PCR в реално време: 218 - контролна проба (чувствителна към рифампицин); 93 - положителна контрола за мутацията на Ser-Trp TCG-TGG; 4482 - положителна контрола за мутация на Ser-Leu TCG-TTG; 162-322 - експериментални проби. Резултат от изчисляването на кинетичните криви на амплификация на 4 канала: канал 1: 393 - положителна контрола за мутация на Ser-Trp TCG-TGG; канал 2: 4482 - положителна контрола за мутация на Ser-Leu TCG-TTG; 162, 163, 172, 295 - експериментални проби; канал 4: кинетични криви на амплификация на всички проби, участващи в експеримента. Положителна контрола на реакцията на амплификация. Заключения: Въз основа на резултатите от анализа бяха идентифицирани следните мутации, определящи устойчивостта към рифампицин: в проби 162,163,172,295-Ser-Leu TCG-TTG. Същият принцип се използва за определяне на лекарствената резистентност към изониазид за гените katG и inhA, което определя най-честите мутации.

    Идентификация на щама на mycobacterium tuberculosis

    Най-добре изследван метод за идентифициране на щамове на Mycobacterium туберкулоза е техника, наречена ограничение дължина фрагмент полиморфизъм (RFLP RFLP,. Или в английски език) и която се основава на fragmentirovanin (ограничение) на Mycobacterium туберкулоза ДНК ензим Pvu II и фрагментите, получени последваща хибридизация с някои специфични последователности на ДНК неговия повтарящ се елемент IS6110. Интерспеци променливост реализира чрез различен брой повторения IS6110 и тяхното местоположение на ДНК. както и различни разстояния между определени точки на атака рестрикционен ензим (рестрикционни сайтове) и IS6110 елемент. Тази технология е много сложна и отнема много време. След лечение с ДНК, получена от култура на Mycobacterium туберкулоза, гел електрофореза се провежда с рестрикционен ензим, и след това се прехвърля ДНК фрагменти с различни дължини на нитроцелулозна мембрана, хибридизацията се провежда с фрагменти на IS6110-елемент и се открива чрез ензимни реакции. Полученият модел специфични ДНК ленти характеризират конкретния щам на Mycobacterium туберкулоза. С помощта на компютърния анализ се разкрива самоличността или свързаността на щамовете. Въпреки факта, че RFLP методът е най-дискриминационен, т.е. идентифицира най-голям брой разлики в анализираните щамове, е неефективно за малък брой (по-малко от 5) IS6110-повторения, наблюдавани при някои щамове. На фиг. 13-14 показват резултатите от RFLP-типизиране на щамове.

    Алтернатива може да бъде методът на размножаване - анализ на полиморфизма на спейсери ДНК последователности - междинни между директните повторения на DR областта. Когато се извършва размножаване на щамовете, PCR се провежда с праймери, ограничаващи DR областта, след което се формират фрагменти с различна дължина, които хибридизират с променливите междинни области на ДНК. Представен е анализ на спейсерните последователности на DR областта. според изследователите, по-прости, продуктивни и подходящи за първичен скрининг на щамове и предварителен епидемиологичен анализ, както и за изследване на пряк клиничен материал.

    Ясно е, че по-ефективен и технологично достъпен метод е VNTR (съкращение от английски думи), или метод за определяне на променлив брой на тандемни повторения в точната ДНК на Mycobacterium туберкулоза. Този метод се основава само на използването на PCR и не изисква никаква допълнителна манипулация. Тъй като броят на тандем повторения в различните щамове и различни при различни локуси на electrophoregram на PCR продуктите, получени са определени и са анализирани фрагменти с различни размери. Според изследователите, като се използват VNTR постигнала висока степен на щамове дискриминация, отколкото по метода на RFLP.

    През последните години се отделя голямо внимание на разпространението на щамове Mycobacterium tuberculosis от семейство W-Beijing (понякога наричани щам Пекин), които до голяма степен са устойчиви на наркотици.

    Основни изисквания към качеството на молекулярните биологични изследвания

    Основни регулаторни документи за PCR

    Поръчки руското министерство на здравеопазването: №45 от 2.7.2000 г.. номер 109 от 21.03.2003 г.. номер 64 от 02/21/2000, насоките: 1.3.1888-04 "Организация на работата в изследвания с използване на PCR материал заразени с патогенни биологичен агенти от групи III-IV на патогенност "; 1.3.1794-03 "Организация на проучванията, използващи PCR с материал, заразени с микроорганизми I-II патогенност групи". 2003. 3.5.5.1034-01 "обеззаразяване на материала, заразени бактерии I-IV патогенност групи при използване на PCR," 2001 Приложението 11 на унифицирани инструкциите за микробиологичните методи за изследване за идентифициране, диагностика и лечение на туберкулоза.

    Персоналът

    Изпълнение на молекулярно-биологични изследвания могат да държат лекарите по клинична лаборатория за диагностика, лекари бактериолози, вирусолози, лекари, биолози, клинична лаборатория за диагностика, както и специалисти със средно медицинско образование, преминал специализация и обучение на високо ниво по предписания начин.

    Организиране на лабораторни помещения

    Необходими са следните лабораторни помещения:

    • Областта за обработка на проби е лаборатория, адаптирана за работа с инфекциозни агенти от групите на патогенност III-IV, съгласно Методически инструкции 13.1888-04.
    • Зона за приготвяне на реакционни смеси PCR - лабораторно помещение, което осигурява защита от вътрешно лабораторно замърсяване - "чиста" зона.
    • • Ако за анализиране на PCR продукти се използва електрофореза или хибридизация. лаборатория стая, в която ДНК фрагменти умножените са извлечени от тръбите и амплификация, съответно, може да се получи в околната среда, в съответствие с изискванията за PCR лаборатории (1.3.1794-03 насоки, ориентиране 1.3.1888-04) трябва да бъде напълно се изолира от помещенията, посочени в предходните параграфи. Тя трябва да бъде изключен от зоната на движение към зона електрофореза за работа с пробата и "чиста" площ от всякакви персонал, оборудване, материали и предмети, както и прехвърлянето на въздух през вентилационната система, или в резултат на проекти. Тази зона не се изисква за флуорометричното откриване на PCR продукти.
    • Стаята за документация и обработка на резултатите е оборудвана с компютри и необходимото офис оборудване. Тази стая може да съдържа оборудване, което осигурява откриване на PCR продукти без отваряне на тръбата. - флуоресцентни PCR детектори и термични цикли за PCR в реално време.

    Санитарните и епидемиологичните изисквания за първично третиране на храчките са подобни на стандартните микробиологични изисквания за работа с микобактериална туберкулоза.

    Завършване на лабораторно оборудване за PCR диагностика

    Лабораторията включва оборудване за следните стаи.

    • подготовка на пробите стайна съдържа следното оборудване: клас на защита II ламинарен "SP-1,2": в твърдо състояние термостат гигантска капачка за тръби тип "Епендорф"; микроцентрофуга при 13 000 об / мин; центрофуга (Vortex); хладилник с температурен диапазон от -20 ° С до 10 ° С; пипети с променлив обем на серията "Rroline"; помпа с OM-1 уловителна колба; статив за пипети; работно място за стативи 200x0,5 ml; работно място за стативи 50x1,5 ml; Стендове за съхранение на епруветки 80x1.5 ml;
    • Стая за приготвяне на реакционна смес: защитна камера PCR-кутия ("Laminar-C 110 cm); центрофугиране - Vortex; Пипети с променлив обем от серията Proline; статив за пипети; работно място за статив 200x0,2 ml; Стендове за съхранение на епруветки 80x1.5 ml; хладилник с температурен диапазон от -20 ° С до + 10 ° С;
    • помещение за електрофореза: камера за хоризонтална електрофореза; захранване; трансилюминатор;
    • ДНК усилватели или анализатори на нуклеинови киселини (PCR в реално време) с компютър и софтуер; могат да бъдат поставени във всяка свободна стая. Ако се използва PCR технология в реално време. няма нужда от място за електрофореза.

    Външен контрол на качеството

    За да бъдат сигурни в получаването на обективни надеждни резултати, лабораториите трябва да участват в системата за външна оценка на качеството на лабораторните изследвания.

    Участниците в системата за контрол на качеството получават; 12 флакона суспензии лиофилизирани бактериални клетки, две от които съдържат Е.коли Е. кокосови, 3 флакона с Mycobacterium туберкулоза (авирулентен щам) при 10 2 / мл; 3 ампули с клетки от подобен щам в концентрация от 10 4 / ml; 2 ампули nontubercular Mycobacterium М. авиум-intracellulare и M. kansasii в концентрация от 10 5 / мл.

    Разпространените тестове за външно оценяване на качеството са предварително тествани в две независими лаборатории с богат опит в тази област.